维甲酸X受体对缺氧/复氧诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬的调控作用

发布时间：2024-04-16 19:37

　　目的:探讨维甲酸X受体(RXR)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC Ⅱ)自噬的调控作用及分子机制。方法:常氧培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,将生长至对数生长期的细胞随机分为5组:(1)对照组:细胞于正常条件下培养30 h;(2)缺氧/复氧组:细胞缺氧6 h,复氧24 h;(3)溶剂DMSO组:细胞于造模前1.5 h用浓度低于0.1%的DMSO进行预处理,其余处理同H/R组;(4)9-顺式维甲酸(9-RA)组:细胞于缺氧前1 h用9-RA(100 nmol/L)预处理;(5)HX531组:细胞先用9-RA处理0.5 h,然后用HX531(2.5μmol/L)处理1 h。采用CCK-8法检测各组细胞活力;免疫荧光染色法观察各组细胞RXRα表达变化;用透射电镜观察细胞内部超微结构的改变;RT-PCR检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、自噬相关蛋白beclin 1及LC3、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和P62 mRNA水平的表达。Western blot检测p-AMPK、beclin 1、LC3-Ⅱ、p-mTOR和P62蛋白的表达。结果:与对照组相比,其余4组细胞的细胞活...

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【部分图文】：

图1CCK-8法检测的各组细胞A值变化

与Con组相比，其余4组细胞的A值均显著下降（P<0.05）；与DMSO组相比，9-RA组的A值显著上升（P<0.05）；与9-RA组相比，HX531组的A值显著降低（P<0.05）；而H/R、DMSO和HX531组之间两两相比，A值无显著差异（P>0.05），见图1。2免疫荧光....

图2各组细胞RXRα的表达变化及荧光强度

本研究选择了多个自噬通路上有典型指示作用的自噬相关蛋白。在自噬信号通路中，腺苷酸活化蛋白激酶（adenosinemonophosphate-activatedproteinkinase,AMPK）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammaliantargetofrapamy....

图3各组细胞电镜超微结构

通过对AECⅡ进行缺氧/复氧、加用RXR激动剂和拮抗剂等干预，CCK-8细胞活力检测显示，缺氧/复氧会引起细胞活力下降，而激动了RXR后，细胞活力有所回升。各组细胞电镜观察结果也提示，除正常对照组外，其余各组细胞超微结构损伤加重，其中H/R、DMSO和HX5313组细胞内可观察....

图4各组细胞AMPK、beclin1、LC3、mTOR和P62的mRNA表达

图3各组细胞电镜超微结构图5各组细胞p-AMPK、beclin1、LC3-Ⅱ、p-mTOR和P62的蛋白水平

本文编号：3956587