抗环状瓜氨酸肽抗体诊断试剂的制备和载脂蛋白E表达的研究

发布时间：2024-05-15 02:59

　　目的:(1)类风湿性关节炎是一种常见的自身免疫性疾病。致残率高且预后差,对病人的身体造成很大影响,因此早期的诊断极为重要。近年来,抗环状瓜氨酸肽抗体被公认为诊断类风湿性关节炎新的血清指标物,目前临床上对这一指标物的检测采用化学发光法,此法受仪器干扰较大且检测耗时长,更重要的是检测试剂主要依赖进口,使患者和社会医疗成本增高,因此拥有我国自主研发的试剂具有很重要的意义。胶乳增强免疫比浊法具有灵敏度高、特异性高、线性范围宽,且能在普通生化分析仪上检测等优点,本课题根据胶乳增强免疫比浊法的原理,制备抗环瓜氨酸肽抗体免疫诊断试剂。(2)载脂蛋白E是血脂的检测指标物之一,想要获取纯的载脂蛋白E,必须有纯合子的供血者,而且无法得到结构和功能研究所需的人类非自然存在的突变体,所以重组载脂蛋白E非常必要,目前市场上已有的试剂所用载脂蛋白E抗原标准品主要依赖进口,获取难度大,本课题通过大肠杆菌发酵进行载脂蛋白E的表达,使用镍离子亲和层析法进行纯化,得到较纯的载脂蛋白E,并将其作为载脂蛋白E检测试剂的标准品。方法:(1)乳液聚合法制备羧化聚苯乙烯微球作为载体,偶联环状瓜氨酸肽(cyclic citrulli...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.2是PS羧基微球与BSA-CCP整体偶联的原理图

津医科大学硕士学位论文一、羧基PS微球与瓜氨酸环肽偶联方法的研究先加标本和R1，37oC下温育5分钟，读取吸光度A1，加R2后，在37oC反应5分钟，读取吸光度A2，在600nm下连续测试5min，并记录5min内吸光度变化，计算差值△A=A....

图1.3是PS羧基微球与BSA及CCP层层偶联的原理图

取固化量为5%154.6nmPS微球100μL三份，羧基活化方法同上（1.1.3），入做好的偶联物BSA-CCP过量，分别加0.01%、0.05%和0.1%Tween20，室反应3h，然后离心三次，测定偶联前后粒径的变化判断是否偶联成功，用pH.4Tr....

图1.5BSA巯基化程度与Traut's用量的关系(*p<0.1)

图1.5BSA巯基化程度与Traut's用量的关系(*p<0.1).2Linker与CCP的偶联通过脱盐柱计算产率CCP的分子量为2341Da，而Linker与CCP偶联后分子量＞2341Da袋已经透析除去了Linker，如图1.6所示，第一....

图1.7SDS-PAGE凝胶电泳图

17图1.7SDS-PAGE凝胶电泳图的Tween20对整体偶联法制PS-CCP的影响.05%和0.1%三种浓度Tween20进行偶联实验表1.7所示，不加Tween20和加有0.01%的20浓度太低不足以起到静电屏蔽作用，而通过其偶联前后粒径变化....

本文编号：3973799