缺氧及缺氧/饥饿环境下E109及恩度对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响

发布时间：2024-06-04 03:05

　　目的:通过观察单纯缺氧(1%O2)和缺氧/饥饿两种环境下重组人血管内皮抑制素(endostar)及多靶点抗血管生成药物E109(尚未上市的试验药物,因涉及商业保密、以其临床试验的伦理批号后四个字母表示)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)形态、增殖,成管以及迁移能力之作用;观察缺氧环境下两种药物对内皮细胞标志物蛋白水平的影响,并与前期观察到的缺氧环境下单靶点抗血管生成药贝伐单抗(bevacizumab)对HUVEC的作用结果对比,找出三种代表性抗血管生成药对人脐静脉内皮细胞作用的异同之处。方法:选取状态良好的对数期HUVEC进行实验,使用Billups-rothenber细胞缺氧研究装置建立缺氧实验环境,并在此基础上以无血清培养基培养细胞建立缺氧/饥饿环境。观察细胞形态并拍照,通过MTT法检测环境及药物对细胞增殖的影响,并根据MTT细胞增殖实验结果,选择后续迁移及三维培养成管实验中处理时间点及药物浓度。通过Transwell迁移实验、三维培养成管实验分别检测两种环境下E109及恩度对HUVEC迁移、成管能力的影响,...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2不同环境处理后HUVEC的形态学改变注：NC（NormolControl）代表细胞于正常环境培养；H（Hypoxia）代表细胞于

结果1实验环境及药物处理引起HUVEC形态学变化1.1正常、单纯缺氧、单纯饥饿及缺氧/饥饿环境对HUVEC细胞形态的影响使用倒置显微镜观察不同环境处理后的细胞，与正常培养环境相比，单氧环境、单纯饥饿环境及缺氧/饥饿环境处理24、48小时后，部分HUVE出现梭状改变，并发....

图3缺氧+E109处理后HUVEC的形态学改变注：H+E1代表缺氧+1μmol/LE109处理；H+E4代表缺氧+4μmol/LE109处理；H+E6

在缺氧+E10948小时组，可见部分细胞的伪足仍然存在，存活下来的细胞胞质回缩，发出伪足的细胞数目减少，伪足的长度也明显缩短。部分细胞的伪足甚至出现断裂。具体如图3所示。图3缺氧+E109处理后HUVEC的形态学改变注：H+E1代表缺氧+1μmol/LE109处理；H+E4代表....

图4缺氧/饥饿+E109处理后HUVEC的形态学改变注：H/S+E1、H/S+E4、H/S+E6分别代表缺氧/饥饿环境下同时给予1μmol/L、

19图4缺氧/饥饿+E109处理后HUVEC的形态学改变注：H/S+E1、H/S+E4、H/S+E6分别代表缺氧/饥饿环境下同时给予1μmol/L、4μmol/L、6μmol/LE109处理（后文中出现的缩写，含义与此处相同，不再注明）。2.1.4缺氧环境下不同浓度恩度....

图5缺氧+恩度处理后HUVEC的形态学改变

部分细胞漂浮死亡，恩度浓度到达800μg/ml时，伪足数目的减少并不明显，且漂浮死亡的细胞数较缺氧+400μg/ml恩度组未见明显增加。单从形态学上分析，恩度对缺氧状态下的HUVEC抑制作用较弱。具体如图5所示。图5缺氧+恩度处理后HUVEC的形态学改变

本文编号：3988772