血卟啉单甲醚与丫啶黄联合增强肿瘤靶向声动力学治疗的研究

发布时间：2024-12-27 05:33

　　卵巢癌是女性生殖系统中最致命的恶性肿瘤,严重威胁着妇女的生命健康安全。且患病初期症状隐匿并伴有腹膜的转移,给卵巢癌的诊断和治疗带来了极大的困难。临床常用的治疗手段有手术治疗、放疗、化疗等。然而,由于手术治疗易残存肿瘤细胞、肿瘤对放疗的敏感性有限、化疗易产生耐药性等缺点,往往导致治疗的失败。为了解决上述问题,联合治疗在抗肿瘤治疗方面成为研究的热点。基于此,本课题构建了一种多功能靶向抗肿瘤纳米给药系统（Lipo/HMME/ACF@MnO₂-AS1411）,将该系统联合超声治疗（Ultrasound,US）具有以下优势:（1）利用PEG一步还原法完成了脂质体表面的修饰;（2）具有pH/GSH/US三重刺激响应控释的特性;（3）声动力治疗（HMME）和HIF-1α抑制剂（ACF）的有机结合可以有效提高抗肿瘤效果;（4）AS1411的主动靶向性使得药物可以有效蓄集于肿瘤部位,且可以提高纳米系统的分散性和生物相容性;（5）MnO₂被肿瘤微环境降解为Mn²⁺可用于增强磁共振成像。相关研究如下:1、Lipo/HMME/ACF@MnO

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略词表
第1章 引言
第2章 Lipo/HMME/ACF@MnO₂-AS1411的制剂学研究
    1 仪器与试剂
        1.1 仪器
        1.2 试剂
    2 实验方法
        2.1 空白脂质体的制备
        2.2 空白脂质体的制备处方筛选
            2.2.1 磷脂和胆固醇的比例
            2.2.2 孵育温度
            2.2.3 探超时间
        2.3 Lipo/HMME/ACF的制备
        2.4 Lipo/HMME/ACF的制备处方筛选
            2.4.1 孵育温度
            2.4.2 孵育时间
            2.4.3 药脂比
        2.5 Lipo/HMME/ACF@MnO₂的制备
        2.6 Lipo/HMME/ACF@MnO₂-AS1411的制备
        2.7 HMME和ACF含量测定方法的建立
            2.7.1 检测波长的确定
            2.7.2 色谱条件
            2.7.3 专属性考察
            2.7.4 标准曲线的建立
            2.7.5 准确度考察
            2.7.6 精密度考察
        2.8 包封率的测定
        2.9 脂质体的性质考察
            2.9.1 稳定性
            2.9.2 粒径分布及Zeta电位的考察
            2.9.3 透射电镜(TEM)、元素分布(Mapping)及元素分析(EDX)
            2.9.4 紫外全波长扫描图(UV)
            2.9.5 凝胶电泳分析
        2.10 体外释药行为的考察
        2.11 体外MRI考察
        2.12 统计学分析
    3 结果与讨论
        3.1 空白脂质体的制备处方筛选
            3.1.1 磷脂和胆固醇的比例
            3.1.2 孵育温度
            3.1.3 探超时间
            3.1.4 空白脂质体的最优制备处方
        3.2 Lipo/HMME/ACF的制备处方筛选
            3.2.1 孵育温度
            3.2.2 孵育时间
            3.2.3 药脂比
            3.2.4 Lipo/HMME/ACF的最优制备处方
        3.3 HMME和ACF含量HPLC测定方法
            3.3.1 检测波长的确定
            3.3.2 专属性考察
            3.3.3 标准曲线的建立
            3.3.4 准确度考察
            3.3.5 精密度考察
        3.4 包封率的测定
        3.5 脂质体的性质考察
            3.5.1 稳定性
            3.5.2 粒径分布及zeta电位的考察
            3.5.3 透射电子显微镜(TEM)、元素分布(Mapping)及元素分析(EDX)
            3.5.4 紫外可见全波长扫描(UV-Vis)
            3.5.5 凝胶电泳分析
            3.5.6 体外释药行为
            3.5.7 体外MRI考察
    4 本章小结
第3章 Lipo/HMME/ACF@MnO₂-AS1411的体外抗肿瘤活性研究
    1 仪器和试剂
        1.1 仪器
        1.2 试剂
    2 实验所需溶液的配制
        2.1 PBS的配制
        2.2 含血清培养基的配制
        2.3 细胞冻存液的配制
        2.4 1%乙酸溶液的配制
        2.5 4%SRB溶液的配制
        2.6 50%TCA溶液的配制
        2.7 10mM Tris碱液的配制
    3 实验方法
        3.1 细胞培养
            3.1.1 细胞培养前的准备
            3.1.2 细胞传代
            3.1.3 细胞计数
        3.2 细胞摄取
        3.3 细胞抑制率考察
            3.3.1 SRB法检测抑制率
            3.3.2 Lipo@MnO₂、HMME和ACF在常氧和乏氧条件下的细胞毒性
            3.3.3 Lipo/HMME/ACF@MnO₂-AS1411的细胞抑制率
        3.4 单细胞凝胶电泳
        3.5 细胞凋亡
        3.6 qPCR测定VEGFmRNA的表达
        3.7 Westernblotting实验
    4 结果与讨论
        4.1 细胞摄取
        4.2 细胞抑制率考察
        4.3 单细胞凝胶电泳
        4.4 细胞凋亡
        4.5 qPCR测定VEGF mRNA的表达
        4.6 Western blotting实验
    5 本章小结
第4章 Lipo/HMME/ACF@MnO₂-AS1411的体内抗肿瘤活性研究
    1 仪器与试剂
        1.1 仪器
        1.2 试剂
        1.3 实验动物
    2 实验方法
        2.1 荷瘤裸鼠模型的建立
        2.2 Lipo/HMME/ACF@MnO₂-AS1411在裸鼠体内的组织分布研究
            2.2.1 IR780含量测定方法的建立
            2.2.2 Lipo/IR780@MnO₂-AS1411的制备
            2.2.3 Lipo/IR780@MnO₂-AS1411在裸鼠体内的组织分布
        2.3 Lipo/HMME/ACF@MnO₂-AS1411体内抗肿瘤活性研究
            2.3.1 肿瘤生长抑制的药效学考察
            2.3.2 HE染色病理切片考察
            2.3.3 TUNEL凋亡考察
        2.4 体内磁共振成像图
    3 结果与讨论
        3.1 IR780标准曲线的建立
        3.2 Lipo/HMME/ACF@MnO₂-AS1411在裸鼠体内的组织分布研究
        3.3 体内抗肿瘤活性考察
            3.3.1 荷瘤裸鼠瘤体积和体重变化
            3.3.2 HE染色病理切片
            3.3.3 TUNEL凋亡
        3.4 体内磁共振成像图
    4 本章小结
第5章 全文总结
参考文献
个人简介
致谢



本文编号：4021211