二甲双胍对过氧化氢所致脑片损伤的作用研究
发布时间：2017-05-29 20:00
本文关键词：二甲双胍对过氧化氢所致脑片损伤的作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的:本研究通过过氧化氢刺激小鼠脑片,建立离体脑片损伤模型,预先给予不同浓度二甲双胍进行干预,探讨二甲双胍对过氧化氢所致脑片的保护作用及其可能的机制。方法:脑片损伤模型的制备及实验分组:选用SPF级昆明种小鼠172只,制备成脑片后分为正常组、模型组、药物低剂量组和药物高剂量组四组:四组分别在37℃通有饱和氧的正常人工脑脊液(normal Artificial Cerebrospinal Fuid,n ACSF)中预孵育30min后;药物组给予不同浓度二甲双胍孵育30min,正常组和模型组正常孵育30min;模型组和药物组转至含过氧化氢的ACSF中孵育60min,正常组正常孵育60min。脑片均孵育120min后进行后续指标的测定。孵育后的脑片用氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)溶液进行显色、有机溶剂抽提测定溶液吸光度、脑片匀浆后进行乳酸脱氢酶(Lactic Dehydrogenase,LDH)的活性测定、氧化指标总超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、丙二醛(Maleic Dialdehyde,MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-PX)的测定及定量q PCR(Polymerase Chain Reaction)测定基因PICK1 m RNA的表达情况、Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2(B-cell Leukemia/Lymphoma 2)和Bax(Bcl-2 Associated X protein)的表达情况。结果:(1)与正常组相比,模型组和药物组的脑片TTC染色都明显变浅,而药物组与模型组比较,脑片TTC染色明显加深,且高剂量的染色比低剂量深;(2)在490nm处测定吸光度A490nm,模型组与正常组比较(P0.01),脱色产物明显增加,二甲双胍低剂量组(P0.05)和二甲双胍高剂量组(P0.01)的A490nm与模型组比较脱色产物都增加;(3)模型组与正常组比较,模型组(P0.01)乳酸脱氢酶释放率显著增加,二甲双胍低剂量组(P0.05)和二甲双胍高剂量组(P0.05)与模型组比较都减少了,而二甲双胍低剂量组和高剂量组间差异不是很明显;(4)?脑片T-SOD测定结果:与正常组比较,模型组的T-SOD活性显著降低(P0.01);给药低剂量组(P0.05)和给药高剂量组(P0.01)与模型组比较,T-SOD的活性都有升高;?脑片MDA测定结果:与正常组比较,模型组脑片的MDA活性增强(P0.05);低剂量组(P0.05)和高剂量组(P0.01)MDA活性都有所下降;?脑片GSH-PX测定结果:与模型组比较,正常组(P0.05)和高剂量组(P0.05)的GSH-PX活性都增加,而低剂量组与模型组比较(P0.05),不具备统计学意义;(5)PICK1基因m RNA的表达:与正常组比较,模型中的表达明显增加(P0.01);而经过二甲双胍预处理的脑片组(低剂量组和高剂量组),低剂量组和高剂量组较模型组有所减少(P0.05,P0.05),且高剂量组减少较低剂量组多;(6)Bcl-2/Bax的表达:与正常组比较,模型组Bcl-2/Bax的表达明显下降;而经二甲双胍(低剂量组和高剂量组)预处理后,Bcl-2/Bax的表达有所升高。结论:(1)过氧化氢诱导的脑片损伤,而二甲双胍对过氧化氢诱导脑片氧化损伤有一定的保护作用。(2)脑片的氧化损伤可激活PICK1的上调,二甲双胍通过抑制PICK1的表达对过氧化氢所致的脑片损伤有保护作用。(3)二甲双胍可上调凋亡蛋白Bcl-2/Bax的表达从而对过氧化氢诱导的脑片损伤起保护作用。
【关键词】：脑片 二甲双胍 氧化应激 PICK1 凋亡蛋白
【学位授予单位】：湖北科技学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R965
【目录】：
- 缩略词4-5
- 中文摘要5-7
- Abstract7-9
- 前言9-11
- 实验材料11-16
- 1 实验动物11
- 2 主要试剂和仪器设备11-13
- 3 主要试剂的配制13-16
- 实验方法16-24
- 1 小鼠全脑脑片的制备16-17
- 2 TTC染色法筛选二甲双胍给药剂量17
- 3 实验分组及模型的制备17-18
- 4 脑片TTC染色产物的测定18
- 5 脑片乳酸脱氢酶（LDH）的测定18
- 6 脑片氧化指标的测定18-20
- 7 实时荧光定量PCR法检测脑片PICK1 mRNA的表达20-21
- 8 蛋白免疫印记法检测脑片凋亡相关蛋白Bcl-2 和Bax的表达21-23
- 9 统计学方法23-24
- 实验结果24-32
- 1 二甲双胍对H_2O_2所致脑片损伤TTC染色的影响24
- 2 二甲双胍对H_2O_2所致脑片损伤TTC染色产物的影响24-25
- 3 二甲双胍对H_2O_2所致脑片损伤乳酸脱氢酶（LDH）的测定25-26
- 4 二甲双胍对H_2O_2所致脑片损伤氧化指标的测定结果26-28
- 5 二甲双胍对H_2O_2所致脑片损伤脑片PICK1基因mRNA的表达28-29
- 6 二甲双胍对H_2O_2所致脑片损伤凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达29-32
- 讨论32-34
- 结论34-35
- 参考文献35-38
- 附录38-39
- 文献综述39-49
- 参考文献44-49
- 攻读学位期间取得的学术成果49-50
- 致谢50
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本文编号：405544
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