多肽修饰的联吡啶钌脂质体的制备、表征以及抗肿瘤作用研究

发布时间：2017-06-11 13:03

  本文关键词：多肽修饰的联吡啶钌脂质体的制备、表征以及抗肿瘤作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目前癌症仍是影响人类健康长寿的大敌,其中,脑胶质瘤的治愈率一直很低。传统的手术治疗很难彻底根除肿瘤组织,化疗是必要的辅助治疗手段。然而由于血脑屏障(Blood brain barrier, BBB)的存在,一方面化疗药物很难入脑,另一方面药物入脑后容易对正常脑组织产生毒副作用。因此如何克服透过血脑屏障以及降低药物毒性,提高药物抗肿瘤疗效是亟待解决的问题。基于以上问题,本文主要从两个方面入手：第一、合成两种具有广谱抗肿瘤作用的多吡啶钉配合物作为研究的前体药物,并用脂质体包裹以期降低药物毒性。因为钉配位化合物具有低毒、易吸收、易排泄、易修饰和易示踪等优点。第二构建一种有多肽修饰的主动靶向性长循环脂质体递药系统,使其携带自身带有荧光的联吡啶钉配合物靶向性入脑,透过血脑屏障的阻碍,并通过体外细胞实验和体内活体实验考察其抗肿瘤作用。因为主动靶向长循环脂质体具有主动靶向性、缓释性、长循环性、低毒性和高稳定性等优点。第一部分制备了用穿膜肽(RVG-derived peptide, RDP)修饰的长循环联吡啶钌配合物主动靶向脂质体,并对其理化性质进行研究评价。首先合成两种具有抗肿瘤作用的多吡啶类钉配合物,2.2’-联吡啶钌配合物和1.10-菲罗啉钌配合物,通过MTT法检测他们各自对肿瘤细胞的半数抑制率(IC50),选择2.2’-联吡啶钌配合物作为药物代表,进一步研究其抗肿瘤特性。其次将具有脑靶向作用的RDP与二硬脂酰基磷脂酰(DSPE-PEG-NHS, double solid phase epitaxy-polyethylene glycol-N-Hydroxysuccinimide)进行偶联,制成导向化合物DSPE-PEG-RDP。之后采用薄膜分散法分别制备RDP修饰的2.2’-联吡啶钌配合物主动靶向脂质体(RDP-Ru-Lip, polypyridyl ruthenium complex liposome modified by RDP)和普通2.2’-联吡啶钌配合物脂质体(Ru-Lip,polypyridyl ruthenium complex liposome). 用激光粒度及Zeta电位仪、透射电镜、生物质谱仪和紫外分光光度计进行表征,考察其理化性质。通过透析法测定脂质体包封率,活体成像实验、倒置显微镜观察法、免疫荧光方法检验其靶向性,并通过MTT实验验证其对肿瘤细胞的影响。结果表明RDP修饰后的2.2’-联吡啶钌配合物脂质体平均粒径为(94.56±5.97)nm,包封率为(78.86±2.78)%,而普通脂质体平均粒径为(90.20±2.23)nm,包封率为(79.62±±3.62)%,并且所制得的脂质体重现性高,稳定性良好。第二部分着重考察所制得脂质体靶向性和对肿瘤细胞的作用效果。通过活体成像实验表明经过RDP修饰的2.2'-联吡啶钌配合物长循环脂质体具有很好的脑靶向作用。通过荧光倒置显微镜观察和MTT细胞实验即3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)也表明RDP修饰2.2’-联吡啶钌配合物脂质体具有明显的嗜神经性,能够选择性进入神经性细胞,IC50显著低于普通脂质体组和未经脂质体包裹的联吡啶钌配合物组(Ru,polypyndyl ruthenium complex).DAPI即4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)染色结果显示,脂质体携带药物进入细胞后,药物2.2’-联吡啶钌多数在胞浆中富集,极少进入细胞核内,推测其抗肿瘤作用主要在胞浆内发挥或启动。综上结果表明：经RDP修饰的2.2’-联吡啶钌配合物长循环脂质体稳定可控,且具有明显的靶脑作用,体外抗肿瘤效果明显,有望成为靶向治疗脑部肿瘤疾病的良好药物载体。本论文研究发现,制备的RDP-Ru-Lip理化性质良好,稳定可控,制备重现性高。通过体外细胞实验表明其体外抗肿瘤细胞效果明显,并具有嗜神经性。通过体内实验表明其能够快速透过血脑屏障,携带药物联吡啶钌靶向性入脑,提高药物浓度。这些实验研究为更多主动脑靶向长循环脂质体和抗肿瘤类金属配合物的研制开发提供了有力的理论支撑。
【关键词】：联吡啶钌 穿膜肽RDP 脂质体 靶向性 抗肿瘤
【学位授予单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943;R96
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 第一章 文献综述10-18
• 1.1 脂质体概述10-12
• 1.1.1 普通脂质体10-11
• 1.1.2 长循环脂质体11-12
• 1.1.3 多肽修饰的脂质体12
• 1.1.4 新型长循环主动靶向脂质体12
• 1.2 穿膜肽RDP12-13
• 1.3 金属配合物作为抗肿瘤药物的研究概述13-18
• 1.3.1 钌类金属配合物抗肿瘤的研究情况13-14
• 1.3.2 钌和钌类金属配合物抗肿瘤特点14
• 1.3.3 钌类金属配合物抗肿瘤机理14-16
• 1.3.4 多吡啶配合物的研究概述16
• 1.3.5 联吡啶钌配合物的研究概述16-18
• 第二章 引言18-22
• 2.1 研究背景18-19
• 2.2 研究目的和意义19
• 2.3 主要研究内容19-20
• 2.4 技术路线20-22
• 第三章 RDP修饰的联吡啶钌主动靶向脂质体的制备、表征22-34
• 3.1 实验仪器与材料22-23
• 3.1.1 实验仪器22-23
• 3.1.2 实验材料23
• 3.2 实验方法与结果23-31
• 3.2.1 联吡啶钌配合物标准品的合成23-24
• 3.2.2 联吡啶钌紫外吸收波长的测定和标准曲线的绘制24-25
• 3.2.3 稳定性考察25
• 3.2.4 脂质体的制备和表征25-31
• 3.3 实验结论与讨论31-34
• 第四章 RDP修饰的联吡啶钌主动靶向脂质体抗肿瘤效果评价34-42
• 4.1 实验仪器与材料34-35
• 4.1.1 实验仪器34
• 4.1.2 实验材料34-35
• 4.2 实验方法与结果35-40
• 4.2.1 细胞摄取实验35-36
• 4.2.2 MTT实验36-38
• 4.2.3 活体成像实验38-40
• 4.3 实验结论与讨论40-42
• 第五章 全文总结42-44
• 参考文献44-50
• 致谢50-52
• 研究生期间撰写发表的文章52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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5 张景R，

本文编号：441615