七氟醚对小鼠基底前脑GABA能神经元的作用及机制研究

发布时间：2017-06-11 16:11

  本文关键词：七氟醚对小鼠基底前脑GABA能神经元的作用及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:全身麻醉药(简称全麻药)作用机制尚未完全阐明。现阶段认为:在哺乳动物中枢神经系统中,全麻药兴奋脑内抑制性γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)能神经元,增强GABAA受体介导的抑制作用,抑制中枢觉醒相关型神经元发挥全身麻醉效应。研究发现基底前脑皮层投射型GABA能神经元具有促觉醒的作用,据此推测这类觉醒相关型GABA能神经元可能是全麻药作用的靶点之一。本课题拟在离体电生理水平上研究临床常用吸入型麻醉药七氟醚对基底前脑皮层投射型GABA能神经元,及与全身麻醉关系密切的GABA能与谷氨酸能信号的作用。为进一步揭示全麻药的作用机制提供科学依据和基础研究。方法:利用GAD67-GFP小鼠制备急性基底前脑离体脑片。采用细胞电生理膜片钳技术研究(1)在全细胞记录电流钳模式下,七氟醚对基底前脑中两种不同亚型的皮层投射型GABA能神经元(BF small Ih和BF large Ih GABA能神经元)活性的作用。(2)在全细胞记录电压钳模式下,七氟醚对BF small Ih和BF large Ih GABA能神经元兴奋性递质传入和抑制性递质传入的影响。结果:(1)150μM七氟醚(灌流5 min)未引起BF small Ih和BF large Ih GABA能神经元动作电位自发放频率明显变化;500μM七氟醚(灌流5 min)明显降低BF small Ih和BF large Ih GABA能神经元动作电位自发放频率;1.5 m M七氟醚(灌流5 min)则完全抑制BF small Ih和BF large Ih GABA能神经元动作电位自发放。(2)在河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)存在时,500μM七氟醚(灌流5 min)不能引起BF small Ih和BF large Ih GABA能神经元膜电位改变。(3)500μM七氟醚(灌流3 min)可引起BF small Ih GABA能神经元自发性抑制性突触后电流(spontaneous inhibitory postsynapatic currents,s IPSCs)和迷你抑制性突触后电流(miniature inhibitory postsynapatic currents,m IPSCs)频率增快以及幅度增大。但BF large Ih GABA能神经元仅见s IPSCs和m IPSCs幅度增大。(4)500μM七氟醚(灌流3 min)引起BF small Ih GABA能神经元自发性兴奋性突触后电流(spontaneous excitatory postsynapatic currents,s EPSCs)频率减慢及幅度缩小;但却BF large Ih GABA能神经元s EPSCs频率增快;对二者的迷你兴奋性突触后电流(miniature excitatory postsynapatic currents,m EPSCs)均无影响。结论:七氟醚对BF small Ih GABA能神经元具有抑制作用,这种作用可能是是通过影响突触前GABA囊泡释放特性和突触后膜GABAA受体开放特性引起抑制性递质传入增强、以及通过影响局部谷氨酸能神经元活性引起动作电位依赖的兴奋性递质传入减弱而实现的;七氟醚同样对BF large Ih GABA能神经元具有抑制作用,而这种作用则可能是通过影响突触后膜GABAA受体开放特性引起抑制性递质传入增强实现的。推测吸入型全麻药七氟醚抑制BF small Ih和large Ih两类与觉醒相关的皮层投射型GABA能神经元是其发挥全麻效应的机制之一。
【关键词】：七氟醚 基底前脑 GABA能神经元 膜片钳技术
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R965
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-9
• 摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 前言13-15
• 材料与方法15-23
• 1. 材料15-17
• 1.1 实验动物15
• 1.2 主要试剂15-16
• 1.3 主要仪器16-17
• 2. 方法17-21
• 2.1 人工脑脊液和电极Qg液的配制17-18
• 2.2 微电极拉制18
• 2.3 制备含有基底前脑区域的急性离体脑片18-19
• 2.4 全细胞记录模式19
• 2.5 电信号采集过程19-20
• 2.6 给药方法20
• 2.7 电生理数据统计与分析20-21
• 3. 技术流程图21-23
• 3.1 实验流程简图21-22
• 3.2 电流钳模式下记录动作电位和膜电位22
• 3.3 电压钳模式下记录突触后电流22-23
• 结果23-42
• 1. 皮层投射型BF GABA能神经元的鉴定与分型23-24
• 2. 七氟醚对BF GABA能神经元活性的作用24-29
• 3. 七氟醚对BF GABA能神经元突触后电流的作用29-42
• 讨论42-47
• 结论47-48
• 参考文献48-53
• 综述 153-65
• 参考文献60-65
• 综述 265-72
• 参考文献69-72
• 作者简介及读研期间主要科研成果72-73
• 致谢73-74

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本文编号：441993