Wnt通路小分子抑制剂BHX抗肿瘤作用机制研究

发布时间：2017-07-02 23:16

  本文关键词：Wnt通路小分子抑制剂BHX抗肿瘤作用机制研究

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【摘要】：目的:Wnt信号通路在肿瘤中起明确作用,在多种肿瘤中均发现β-catenin基因突变以及β-catenin蛋白的异常表达,这与肿瘤的发生发展密切相关。针对当前化疗药物毒性大,副作用多的特点,开发出具有确定靶点,确定疗效的新型靶向抑制剂具有重要意义。BHX就是针对Wnt信号的新型小分子抑制剂,本课题主要目的是围绕BHX针对以下几个方面研究其药效及作用机制:1.观察Wnt通路抑制剂BHX体内外对肺腺肿瘤细胞和乳腺肿瘤细胞的增殖抑制作用。2.从Wnt传导通路角度探讨BHX对恶性肿瘤细胞抑制作用的机制。3.初步探讨BHX抑制Wnt信号通路机制研究。方法:1.为检测BHX体外对恶性肿瘤的抑制作用,选取两种Wnt信号激活的肿瘤细胞系A549(肺腺癌细胞)和MCF-7(乳腺癌细胞)和一种正常肺上皮细胞Beas-2b,利用MTT比色实验和二维克隆实验观察BHX作用于肿瘤细胞和正常肺上皮细胞的增殖抑制差异;裸鼠腹股沟皮下接种A549细胞构造裸鼠移植瘤模型之后随机分组,连续给药21天检测BHX体内药效;2.为进一步研讨BHX对肿瘤抑制作用机制,我们从BHX对Wnt信号通路抑制作用角度分析,首先利用免疫荧光检测BHX对Wnt通路关键蛋白β-catenin蛋白定位影响,然后通过Western Blot法检测BHX对Wnt通路关键蛋白β-catenin核内表达量影响以及下游相关蛋白c-myc、cyclin D1表达影响;流式细胞仪检测分析BHX对Wnt通路下游基因所调控的细胞周期变化;3.明确BHX作用于Wnt信号通路之后,初步分析BHX对Wnt信号通路的抑制机制。Western Blot分析BHX作用后,肿瘤细胞内上游关键蛋白β-catenin总量变化以及其磷酸化形式p-β-catenin表达水平,PCR分析β-catenin基因转录水平变化情况;结果:1)MTT实验结果证明BHX在体外对肿瘤细胞A549和MCF-7具有较强的肿瘤抑制作用,但是对正常肺上皮细胞Beas-2b细胞影响较小;克隆形成实验证明BHX对肿瘤细胞A549和MCF-7长期抑制效果较明显;裸鼠移植瘤实验证明BHX对A549建立的移植瘤模型具有较好的肿瘤抑制作用,且毒性较小。2)免疫荧光实验分析表明BHX使Wnt信号关键蛋白β-catenin在细胞核内分布较不加药组减少;Western blot实验结果显示,存在细胞核内的β-catenin蛋白量减少,下游相关蛋白c-myc和cyclin D1表达量降低;BHX能够使细胞周期发生G1期停滞;3)Western blot实验结果表明细胞内总蛋白β-catenin表达量降低,而p-β-catenin蛋白量并没有增加,反而有点减少;PCR结果显示BHX使β-catenin基因转录减少。结论:1.Wnt信号通路抑制剂BHX在体内外能够有效抑制肿瘤细胞生长和增殖,且具有较小的毒性。2.BHX抑制了Wnt信号通路,同时抑制了细胞核内蛋白β-catenin表达,下游相关蛋白c-myc、cyclin D1表达也减少;细胞周期停滞在了G1期;3.BHX不是通过上游到下游的级联反应抑制Wnt信号通路,而是直接作用于β-catenin使其转录水平减少以达到抑制信号通路的作用。
【关键词】：BHX Wnt 信号通路 β-catenin 细胞周期 裸鼠移植瘤
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-18
• 研究现状、成果11-16
• 研究目的、方法16-18
• 一、BHX体内外抗肿瘤抑制作用18-29
• 1.1 对象和材料18-23
• 1.1.1 实验对象18
• 1.1.2 实验材料18
• 1.1.3 实验仪器18-19
• 1.1.4 主要试剂配制19
• 1.1.5 实验方法19-23
• 1.2 结果23-26
• 1.2.1 BHX体外抗肿瘤作用研究23-26
• 1.2.2 BHX体内抗肿瘤作用研究26
• 1.3 讨论26-28
• 1.4 小结28-29
• 二、BHX通过抑制Wnt信号通路抑制肿瘤细胞增殖29-42
• 2.1 对象和方法29-36
• 2.1.1 实验对象29
• 2.1.2 实验材料29
• 2.1.3 实验仪器29-30
• 2.1.4 主要试剂配制30-31
• 2.1.5 实验方法31-36
• 2.2 结果36-41
• 2.2.1 BHX使A549和MCF-7 细胞核内β-catenin蛋白定位发生变化36-38
• 2.2.2 BHX使肿瘤细胞核内β-catenin蛋白表达量降低38
• 2.2.3 流式细胞仪分析BHX对A549和MCF-7 细胞周期的作用38-39
• 2.2.4 Western blot检测Wnt通路下游蛋白c-myc和cyclinD1蛋白表达情况39-41
• 2.3 讨论41
• 2.4 小结41-42
• 三、BHX对Wnt信号通路抑制作用机制研究42-53
• 3.1 对象和方法42-46
• 3.1.1 实验对象42
• 3.1.2 实验材料42
• 3.1.3 实验仪器42
• 3.1.4 主要试剂配制42-43
• 3.1.5 实验方法43-46
• 3.2 结果46-48
• 3.2.1 BHX导致A549和MCF-7 细胞内β-catenin蛋白总量和p-β-catenin表达降低46-48
• 3.2.2 BHX能够使细胞内β-catenin基因转录翻译减少48
• 3.3 讨论48-52
• 3.4 小结52-53
• 结论53-54
• 参考文献54-60
• 发表论文和参加科研情况说明60-61
• 综述 Frizzled受体及其抑制剂研究进展61-70
• 综述参考文献66-70
• 致谢70-71
• 个人简历71

  本文关键词：Wnt通路小分子抑制剂BHX抗肿瘤作用机制研究

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本文编号：511658