反义核酸对宫颈癌细胞作用的研究

发布时间：2017-07-19 12:05

  本文关键词：反义核酸对宫颈癌细胞作用的研究

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【摘要】：背景:癌症早期的发生发展及癌细胞的生长、侵袭、转移和预后都与血管生成有密切关系。新生血管为肿瘤提供营养,促进肿瘤生长,是肿瘤侵袭转移的前提条件。血管内皮生长因子C(VEGF-C)是目前所知道的作用最强的促进血管生成因子,参与血管生成的多个环节。且具有生成淋巴管的功能。反义药物作为一类新型生物技术来源药物,在抗癌治疗中显示了良好的前景,针对VEGF-C的靶向治疗有可能成为治疗宫颈癌的新方法,本文以VEGF-C为靶标设计一段反义核酸,针对其对人宫颈癌细胞(Hela)的作用进行研究。目的:研究VEGF-C反义核酸及其与紫杉醇联合应用对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响及其初步探讨其作用机制。方法:体外培养人宫颈癌细胞(Hela),分为对照组(Control)、反义寡核苷酸组(ASODN)、随机序列组(Random)、紫杉醇组(Taxol)、反义寡核苷酸联合紫杉醇组(ASODN+Taxol)、随机序列联合紫杉醇组(Random+Taxol)。采用MTT法检测各组Hela细胞的生长增殖,划痕实验检测各组Hela细胞的迁移程度。RT-PCR检测各组mRNA的表达,ELISA检测Hela细胞上清中VEGF-C的分泌。结果:(1)ASODN组具有明显的抑制Hela细胞增殖作用。在48h时增殖抑制率达到39.1%。无论是24h或是在48h时,与Control组相比,Random组均无显著性差异。ASODN+Taxol组对Hela细胞的增殖抑制率高于Taxol组,且具有显著性差异。说明ASODN对Hela细胞具有增殖抑制作用,与紫杉醇联合应用后具有协同作用。(2)ASODN组能够显著抑制Hela细胞迁移。而随机序列组与对照组相比无显著性差异。紫杉醇组对Hela细胞的迁移抑制作用高于反义核酸组。与紫杉醇组相比,反义核酸联合紫杉醇组队Hela细胞的增值抑制作用有一定程度的升高。随机序列联合紫杉醇组则无明显差异。说明反义核酸对Hela细胞有迁移抑制作用,与紫杉醇联合应用后能够增加对Hela细胞的迁移抑制作用。(3)与对照组相比,ASODN组mRNA表达的比值明显下降,反义核酸联合紫杉醇组mRNA表达的比值明显下降。随机序列组、紫杉醇组以及随机序列联合紫杉醇组无明显变化。说明反义核酸能够抑制Hela细胞中mRNA的表达。(4)与对照组相比,反义核酸组的VEGF-C含量明显降低,反义核酸联合紫杉醇组的VEGF-C含量显著下降。说明VEGF-C反义核酸能够显著下调hela细胞中VEGF-C的表达。结论:反义核酸能够通过下调mRNA及蛋白的表达抑制hela细胞的增殖及迁移作用,且与紫杉醇联用后有一定程度的增强作用。
【关键词】：VEGF-C 宫颈癌 反义核酸 血管生成
【学位授予单位】：北京理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96;R91
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 缩略词9-12
• 第一章 绪论12-27
• 1.1 宫颈癌概述12-15
• 1.1.1 宫颈癌的基因学研究12-15
• 1.2 VEGF-C概述15-21
• 1.2.1 VEGF-C的结构与功能15-16
• 1.2.2 VEGF-C在肿瘤各个阶段发挥的作用16-18
• 1.2.3 VEGF-C在宫颈癌中的研究现状18-19
• 1.2.4 □ VEGF-C与宫颈癌淋巴转移的关系19-20
• 1.2.5 □ VEGF-C与宫颈癌预后的关系20
• 1.2.6 □ VEGF-C与抗肿瘤治疗前景20-21
• 1.3 反义核酸概述21-26
• 1.3.1 反义核酸药物的作用机制21
• 1.3.2□ 反义核酸药物的特异抗癌活性□21-22
• 1.3.3 反义核酸药物的种类22-23
• 1.3.4 反义核酸药物药效学的其它问题23
• 1.3.5 反义核酸药物药代动力学23-24
• 1.3.6 反义核酸药物毒副作用特征24
• 1.3.7 反义核酸药物在肿瘤治疗中地位24-25
• 1.3.8□ 反义核酸药物的前景25-26
• 1.4 本研究的切入点及意义26-27
• 第二章 实验内容27-35
• 2.1 实验器材27-29
• 2.1.1 实验药物27
• 2.1.2 Hela细胞27
• 2.1.3 实验药品及试剂27
• 2.1.4 实验仪器27-28
• 2.1.5 实验材料28-29
• 2.2 实验方法29-34
• 2.2.1 溶液的配置29
• 2.2.2 Hela细胞培养技术29-30
• 2.2.3、脂质体-核酸转染复合物30
• 2.2.4、MTT检测反义核酸对细胞增殖的影响30-31
• 2.2.5、划痕法检测反义核酸对细胞迁移的影响31
• 2.2.6、RNA提取31-32
• 2.2.7、DNA聚合酶链式反应（PCR）32-33
• 2.2.8 ELISA检测hela细胞上清VEGF-C表达的影响33-34
• 2.3 数据处理34-35
• 第三章 实验结果35-45
• 3.1 反义核酸对Hela细胞的增殖的影响35-37
• 3.2 反义核酸对Hela细胞迁移的影响37-39
• 3.3 反义核酸对VEGF-C mRNA表达的影响39-44
• 3.4 检测反义核酸对hela细胞上清中的VEGF-C含量的影响44-45
• 第四章 讨论45-47
• 结论47-48
• 本文创新点48
• 展望与设想48-49
• 参考文献49-55
• 攻读学位期间发表论文与研究成果清单55-56
• 致谢56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 李梅;毛福荣;曹学全;张蕾;陈奎生;;VEGF-C在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义[J];肿瘤基础与临床;2007年02期

2 刘冬菊,娄阁;VEGF-C及受体VEGFR-3在宫颈癌中的表达及临床意义[J];实用妇产科杂志;2005年08期

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本文编号：562781