染料木黄酮对宿主和HCMV编码的IE基因相关microRNA表达的影响

发布时间：2017-07-19 14:06

  本文关键词：染料木黄酮对宿主和HCMV编码的IE基因相关microRNA表达的影响

  更多相关文章： 人巨细胞病毒 人星形胶质细胞 染料木黄酮 染色质免疫共沉淀 microRNA

【摘要】：目的:1应用染料木黄酮(genistein,Gen)作药物,探讨在人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染人星形胶质细胞(human astrocyte,AS)中,Gen对HCMV IE基因的作用及对与主要即刻早期启动子(major immediate early promoter,MIEP)结合的组蛋白H3乙酰化的影响。2探讨宿主和HCMV的micro RNA(mi RNA)在Gen抗HCMV感染AS中的作用。方法:1 ASs由人神经干细胞(human neural stem cell,NSC)分化而来,HCMV于人胚肺中(human embryonic lung fibroblast,HELFs)扩增,TCID50法测其滴度。2 Cell counting kit-8(CCK-8)实验测不同药物浓度下的细胞活性与细胞毒性,以选出合适的药物浓度。3 RT-q PCR测IE1、IE2基因及细胞mi RNA200家族、病毒mi R-UL112的表达变化。4染色质免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP)检测与HCMV MIEP结合的组蛋白H3乙酰化的改变。结果:1 CCK-8结果显示,10μmol/L G+V组的cck-8值均高于同时间组的V组。2形态学观察,G组与对照组无明显差别,V组细胞病变明显,V+G组与G+V组的细胞状态相对V组要好,先加药的G+V组的细胞状态相对后加药的V+G组要好。3 RT-q PCR结果表明,同V组相比,10μmol/L G+V与V+G组会降低IE1、IE2基因的表达。4 RT-q PCR结果表明,同V组相比,10μmol/L G+V与V+G组能逆转部分hsami R-200 mi RNA家族及mi R-UL112的下降。5 Ch IP结果显示,10μmol/L G+V与V+G组会降低MIEP结合的组蛋白H3的乙酰化。结论:1 10μmol/L的Gen能一定程度抑制HCMV感染AS所致的增殖异常。2 Gen能一定程度抑制IE1、IE2基因的表达,降低病毒MIEP结合的组蛋白H3的乙酰化,并能逆转部分宿主hsa-mi R200家族及病毒mi R-UL112的下调。Gen可能通过这些作用机理,实现了其抑制病毒IE蛋白的效应。
【关键词】：人巨细胞病毒 人星形胶质细胞 染料木黄酮 染色质免疫共沉淀 microRNA
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第一章 实验材料9-13
• 1.1 细胞9
• 1.2 病毒9
• 1.3 药物9
• 1.4 实验仪器及设备9-10
• 1.5 主要实验试剂10-11
• 1.6 主要试剂配制11-13
• 第二章 实验方法13-25
• 2.1 取材与细胞培养13-15
• 2.2 病毒制备15-16
• 2.3 实验分组16
• 2.4 CCK-8 实验16-17
• 2.5 RT-qPCR测IE1、IE2基因及细胞miRNA200家族、病毒miR-UL112的表达变化17-22
• 2.6 ChIP实验22-24
• 2.7 统计学分析24-25
• 第三章 结果25-34
• 3.1 细胞培养与扩病毒25-27
• 3.2 CCK-8 实验27-28
• 3.3 形态学观测28-29
• 3.4 RT-qPCR检测IE1、IE2基因的表达变化29-30
• 3.5 RT-qPCR检测细胞miRNA200家族、病毒miR-UL112的表达变化30-33
• 3.6 ChIP实验33-34
• 第四章 讨论34-37
• 参考文献37-40
• 文献综述40-52
• 参考文献47-52
• 攻读学位期间的研究成果52-53
• 致谢53-54

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈勇;刘巍;;microRNA影响抗肿瘤药物敏感性相关研究进展[J];临床肿瘤学杂志;2009年09期

2 牛晓晓;王秦秦;;microRNA与肺癌[J];中国肺癌杂志;2010年04期

3 刘静;王小中;;慢性粒细胞白血病相关microRNA的研究进展[J];分子诊断与治疗杂志;2010年04期

4 LEE Younghee;LUSSIER Yves A;;Identification of common microRNA-mRNA regulatory biomodules in human epithelial cancer[J];Chinese Science Bulletin;2010年31期

5 唐志强;;The effect of microRNA-21-siRNA-lentivirus on biological behaviors in human hepatic cancer cell line hepG2[J];China Medical Abstracts(Surgery);2012年01期

6 ;PTEN and PDCD4 are Bona Fide Targets of microRNA-21 in Human Cholangiocarcinoma[J];Chinese Medical Sciences Journal;2012年02期

7 林建宇;朱雨捷;王晶;汤溢飞;徐中华;;急性冠状动脉综合征相关microRNA靶向通路及其功能分析[J];苏州大学学报(医学版);2012年04期

8 崔洪亮;张阳德;;microRNA的协同调控网的构建与研究[J];中国现代医学杂志;2012年33期

9 张明杰;徐卓明;朱丽敏;龚霄雷;黄蕊;;先天性心脏病重度肺动脉高压血浆 microRNA 的分析与验证[J];上海医学;2013年12期

10 孟胜喜;胡义扬;冯琴;;microRNA在中医药防治非酒精性脂肪性肝病中的应用[J];中华中医药杂志;2014年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 荆清;袁文俊;秦永文;;microRNA的基因调控新功能[A];中国生理学会第五届全国心血管、呼吸和肾脏生理学学术会议论文摘要汇编[C];2005年

2 靳新;骆志刚;王金华;管乃洋;;microRNA靶标研究进展[A];中国遗传学会功能基因组学研讨会论文集[C];2006年

3 ;Comparasion of Inhibitory Effects on Survivin Gene Expression in Prostate Cancer by Vector-based microRNA and siRNA[A];2008年全国生物化学与分子生物学学术大会论文摘要[C];2008年

4 朱丹霞;徐卫;缪扣荣;方成;朱华渊;董华洁;王冬梅;范磊;乔纯;李建勇;;慢性淋巴细胞白血病microRNA异常表达研究[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

5 Yangchao Chen;;Small molecule modulators of microRNA-34a with anti-cancer activities[A];2013医学前沿论坛暨第十三届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2013年

6 金希;厉有名;;单纯性脂变与非酒精性脂肪性肝炎间差异microRNA表达谱研究[A];2009香港-北京-杭州内科论坛暨2009年浙江省内科学学术年会论文汇编[C];2009年

7 贾新正;卢肖男;聂庆华;张细权;;鸡部分microRNA的同源预测与克隆验证[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年

8 李炯;段德民;郑克孝;;新型非标记高通量microRNA芯片技术[A];第一届全国生物物理化学会议暨生物物理化学发展战略研讨会论文摘要集[C];2010年

9 徐小涛;陆晓;孙婧;束永前;;肺癌侧群细胞microRNA表达谱检测及初步分析[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年

10 王俊峰;李巍;吴小江;阮康成;;大鼠附睾microRNA表达谱的研究[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 陈英云 乔蕤琳;哈医大成功研发国内首例microRNA转基因及敲减小鼠模型[N];黑龙江经济报;2010年

2 记者 陈青;2厘米以下肝癌检出率88%[N];文汇报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 崔洪亮;microRNA的肿瘤表达研究及协同调控网络分析[D];中南大学;2014年

2 马建华;高粱低磷低氮形态生理特征及低氮响应的microRNA研究[D];山西农业大学;2014年

3 李虔桢;microRNA相关基因遗传多态性与冠心病临床关联及预后研究[D];福建医科大学;2015年

4 王耀辉;血清microRNA作为乳腺癌诊断标志物的研究[D];复旦大学;2014年

5 周霁子;环境因素对心脏畸形胎儿影响的表观遣传学机制[D];复旦大学;2013年

6 张丽;microRNA通过调控小胶质细胞炎性反应参与血管性认知障碍发生发展[D];复旦大学;2014年

7 查若鹏;肝癌转移相关microRNA的鉴定及其分子机制研究[D];复旦大学;2013年

8 方砚田;结肠癌干细胞分选、差异microRNA表达谱检测以及miR-449b-CCND1、E2F3通路在结肠癌干细胞自我更新的机制研究[D];复旦大学;2014年

9 辛成齐;椰枣microRNA鉴定及其在果实发育过程中的表达谱研究[D];中国科学院北京基因组研究所;2015年

10 李栋;先天性心脏病血浆microRNA表达谱及与GATA4靶序列单核苷酸多态性的关联研究[D];山东大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 高智红;应用多样性增量方法识别人类基因组microRNA前体序列[D];内蒙古大学;2010年

2 王娜娜;microRNA进化关系及编码特性研究[D];内蒙古大学;2007年

3 王玫;小麦microRNA的鉴定与分析[D];南昌大学;2007年

4 秦保东;原发性胆汁性肝硬化microRNA表达谱的检测及其功能研究[D];第二军医大学;2013年

5 吴晓妍;基于纳米复合材料及生物放大技术构建的电化学microRNA传感器的研究[D];西南大学;2015年

6 周景辉;2型糖尿病microRNA表达谱及其信号通路研究[D];华南理工大学;2015年

7 姜溪;血浆microRNA-486、microRNA-499在肺癌中的表达及临床价值的研究[D];河北大学;2015年

8 林杉;营养诱导舍饲绵羊非繁殖季节发情相关microRNA筛选及其靶基因功能验证[D];石河子大学;2015年

9 林妹妹;microRNA-192 和 microRNA-21 在 IBD 患者中的表达情况[D];福建医科大学;2015年

10 徐娇阳;循环microRNA用于低氧性肺动脉高压早期诊断的实验研究[D];石河子大学;2015年

，

本文编号：563237