辛伐他汀经p38 MAPKMAPK信号通路调控BMSCs中晚期成骨分化的研究

发布时间：2017-07-27 09:04

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【摘要】：目的探讨在成骨诱导环境下,辛伐他汀对BMSCs成骨分化中晚期的作用和对p 38 MAPK信号通路的影响。方法取20只雌性SD大鼠双侧股骨和胫骨骨髓,全骨髓培养法分离培养BMSCs并传代,取第2代细胞进行实验。实验分为5组,对照组(CM组):完全培养基培养;辛伐他汀组(SIM组):含终浓度为1×10-7 mol/L辛伐他汀的完全培养基培养;成骨诱导培养基组(OM组):含10 mmol/Lβ甘油磷酸钠和50μg/m L抗坏血酸的成骨诱导培养基培养;辛伐他汀和成骨诱导培养基组(OM+SIM组):含终浓度为1×10-7 mol/L辛伐他汀成骨诱导培养基培养;阻断剂组(OM+SIM+SB组):先用p 38 MAPK信号通路阻断剂SB 203580干预30 min后,再采用含终浓度为1×10-7 mol/L辛伐他汀成骨诱导培养基培养。MTT法检测CM组和SIM组细胞活性;ELISA法检测OM组及OM+SIM组培养7、14 d细胞ALP含量。应用实时定量PCR和Western blot方法检测OM组和OM+SIM组第21、28天开始成骨诱导培养1、12、24 h后,骨钙素(osteocalcin,OCN)蛋白和m RNA表达水平,从而确定辛伐他汀作用最佳时间点,随后检测该时间点OM组、OM+SIM组和OM+SIM+SB组p 38、磷酸化p 38(phospho-p 38,p-p 38)蛋白表达,计算p-p 38/p 38。结果 MTT检测示各时间点,SIM组与CM组吸光度(A)值比较差异无统计学意义(P0.05),提示辛伐他汀对BMSCs活性和增殖能力无明显影响。与OM组相比,OM+SIM组7、14 d ALP含量均明显增高,且两组组内7 d ALP含量均高于14 d,差异均有统计学意义(P0.05)。实时定量PCR及Western blot检测示,第21、28天开始成骨诱导培养后,各组OCN m RNA及蛋白在12 h时表达量高于其他时间点(P0.05),且OM+SIM组明显高于OM组(P0.05);确定辛伐他汀诱导成骨干预的最佳起效时间为12 h。阻断剂干预后,12 h时OM+SIM+SB组p-p 38/p 38明显低于其他两组(P0.05),OM+SIM组高于OM组(P0.05)。结论辛伐他汀的最佳起效时间为给药后12 h,其可以提高BMSCs成骨分化中晚期OCN蛋白、m RNA和p-p 38蛋白表达量。
【作者单位】： 华北理工大学;
【关键词】： 辛伐他汀 BMSCs 成骨分化 骨钙素 磷酸化p
【基金】：河北省自然科学基金(H 2013209255) 河北省高等学校科学研究计划(QN 20131007)~~
【分类号】：R96
【正文快照】： 研究表明,他汀类药物具有促进骨形成作用,其作用机制大致可以分为4个方面:促进成骨细胞分化、抑制成骨细胞凋亡、抑制破骨细胞形成以及与维生素D联合作用。1994年,Han等[1]首次发现了丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein ki-nases,MAPKs)家族的重要组成部分——p 38

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本文编号：580620