Dll4靶向纳米药物抗血管生成治疗肿瘤的研究

发布时间：2017-08-12 01:40

  本文关键词：Dll4靶向纳米药物抗血管生成治疗肿瘤的研究

  更多相关文章： Dll4 纳米药物 肿瘤抗血管生成治疗 GD16 FaDu肿瘤

【摘要】：肿瘤血管生成是一个多因素、多步骤的复杂病理过程,以肿瘤血管生成信号通路中的关键分子为靶点开发抗肿瘤药物是目前药物研发的热点。现阶段已有近十种抑制肿瘤血管生成的分子靶向药物成功转化应用于癌症的临床治疗。然而,这些分子靶向药物临床使用一段时间后常常出现低响应和耐药的现象,寻找新的抗肿瘤血管生成治疗靶点显得尤为迫切。近年来,Delta样配体4(Delta-like ligand 4,Dll4)被发现在肿瘤新生血管内皮细胞中高度表达,Dll4-Notch信号通路在肿瘤血管生成中起着非常重要的调节作用,包括调控肿瘤血管的萌芽、分支和影响血流灌注功能等。Dll4在肿瘤血管内皮细胞表面的选择性高表达提示其是一个潜在的抗肿瘤血管生成靶向纳米药物的新的递送靶点。本研究首次构建了一种GD16多肽(H2N-GRCTNFHNFIYICFPD-CONH2)修饰的紫杉醇(PTX)纳米递送系统(GD16-PTX-NP),该纳米药物可特异性地靶向内皮细胞表面高表达的Dll4配体。进一步以荷人头颈癌FaDu(Dll4阴性表达)肿瘤裸鼠为模型,研究该纳米药物的靶向抗血管生成治疗肿瘤的作用和机制。采用乳化-溶剂挥发法制备装载PTX的纳米粒(PTX-NP),通过氨基末端PEG化修饰法将GD16多肽连接到PTX-NP表面制得GD16多肽修饰的紫杉醇纳米粒(GD16-PTX-NP)。透射电镜(TEM)图像显示纳米粒表面形态圆整,大小均一,无聚集粘附现象。采用Malvern Zetasizer Nano ZS纳米粒度仪测得GD16-PTX-NP的粒径为189.2 nm,Zeta电位为-14.2 mv。HPLC测得GD16-PTX-NP的载药量为3.9%,包封率为35.3%。纳米粒在PBS中的释放表现为先突释和后缓释的双相释放过程,在大鼠体内药动学实验中显示出良好的长循环特性。采用高内涵药物筛选技术考察了人脐静脉内细胞(HUVEC)对香豆素6标记的纳米粒的摄取情况。GD16多肽修饰的纳米粒可通过与HUVEC表面高表达的Dll4配体特异性结合促进纳米粒内吞进入血管内皮细胞,游离多肽、低温、菲律宾菌素和氧化苯砷等可显著抑制内皮细胞对纳米粒的摄取。GD16多肽的靶向性可显著增加GD16-PTX-NP对HUVEC增殖、迁移、小管形成和运动性的抑制作用。GD16-PTX-NP可有效地抑制裸鼠体内Matrigel种植体的微血管密度。采用Xenogen小动物成像技术观察到DiR标记的GD16-NP可在肿瘤组织中靶向性高蓄积,并且该效应可被游离GD16多肽阻断。这一结果提示GD16多肽修饰可显著增强纳米粒对肿瘤组织的靶向性。激光共聚焦显微镜图片显示香豆素6标记的GD16-PTX-NP可准确靶向肿瘤血管内皮细胞并进一步诱导其凋亡。以荷FaDu肿瘤裸鼠为模型,考察了GD16-PTX-NP体内抗血管生成治疗肿瘤的活性。GD16-PTX-NP能够通过减少肿瘤组织中的微血管密度和诱导肿瘤细胞的凋亡,有效地延缓肿瘤体积的生长,并且无体重减轻等明显毒副作用。本研究首次构建了靶向肿瘤血管Dll4配体的纳米药物(GD16-PTX-NP),较为系统地评价了GD16-PTX-NP对肿瘤血管内皮细胞的靶向性和抗血管生成活性,揭示了纳米药物靶向肿瘤血管Dll4配体在肿瘤抗血管生成治疗中的潜能和意义。
【关键词】：Dll4 纳米药物 肿瘤抗血管生成治疗 GD16 FaDu肿瘤
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 前言12-14
• 第一部分 Dll4靶向纳米药物的构建与表征14-28
• 1 试剂和仪器14-15
• 1.1 仪器14
• 1.2 材料和试剂14-15
• 2 实验方法15-18
• 2.1 GD16多肽修饰的载紫杉醇纳米粒（GD16-PTX-NP）的构建15
• 2.2 GD16-PTX-NP的表征15-17
• 2.3 GD16-PTX-NP体外释放特性的研究17
• 2.4 GD16-PTX-NP大鼠体内药动学的研究17-18
• 2.5 统计学分析18
• 3 实验结果18-24
• 3.1 GD16-PTX-NP的理化性质的表征18-20
• 3.2 纳米粒中紫杉醇HPLC检测方法的建立20
• 3.3 GD16-PTX-NP的体外释特性20-22
• 3.4 GD16-PTX-NP体内长循环特性22-24
• 4 讨论24-26
• 5 小结26-28
• 第二部分 GD16-PTX-NP肿瘤血管靶向性和抗血管生成活性研究28-50
• 1 仪器和材料28-30
• 1.1 主要仪器28
• 1.2 材料和试剂28-30
• 1.3 细胞和动物30
• 2 实验方法30-35
• 2.1 GD16-PTX-NP体外内皮细胞靶向性研究30-31
• 2.2 GD16-PTX-NP体外抗血管生成活性研究31-33
• 2.3 GD16-PTX-NP抗小鼠体内Matrigel种植体血管生成的研究33
• 2.4 GD16-PTX-NP对FaDu肿瘤组织靶向性的研究33
• 2.5 GD16-PTX-NP对FaDu肿瘤血管靶向性和抗血管生成活性的研究33-34
• 2.6 统计学分析34-35
• 3 实验结果35-46
• 3.1 GD16-PTX-NP体外内皮细胞靶向性35-36
• 3.2 GD16-PTX-NP体外抗血管生成活性36-40
• 3.3 GD16-PTX-NP对小鼠体内Matrigel胶中血管生成的抑制作用40-42
• 3.4 GD16多肽修饰的纳米粒对肿瘤组织的靶向性42-44
• 3.5 GD16-PTX-NP对Fadu肿瘤的血管靶向性和抗血管生成活性44-46
• 4 讨论46-49
• 5 小结49-50
• 第三部分 GD16-PTX-NP靶向抗血管生成治疗肿瘤的研究50-57
• 1 仪器和试剂50-51
• 1.1 主要试剂50-51
• 1.2 实验仪器51
• 1.3 细胞和动物51
• 2 实验方法51-53
• 2.1 GD16-PTX-NP治疗FaDu肿瘤的药效学研究51-53
• 2.2 统计学分析53
• 3 实验结果53-56
• 3.1 GD16-PTX-NP对FaDu肿瘤的治疗作用53-54
• 3.2 GD16-PTX-NP治疗FaDu肿瘤的免疫组化染色分析54-56
• 4 讨论56
• 5 小结56-57
• 结论57-58
• 参考文献58-66
• 综述 Dll4-Notch 信号通路作为肿瘤抗血管生成 治疗靶点的研究进展66-80
• 参考文献73-80
• 硕士期间论文80-82
• 致谢82

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 ZHANG Ping;YAN XianChun;CHEN Yan;YANG ZiYan;HAN Hua;;Notch signaling in blood vessels: from morphogenesis to homeostasis[J];Science China(Life Sciences);2014年08期

2 丁新宇;徐志飞;;Dll4/Notch通路与肿瘤血管形成[J];中国肺癌杂志;2009年11期

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本文编号：659205