阿托伐他汀钙导致胆红素水平升高的相关因素分析及Plin5在其中的主要作用研究

发布时间：2017-08-15 17:31

  本文关键词：阿托伐他汀钙导致胆红素水平升高的相关因素分析及Plin5在其中的主要作用研究

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【摘要】：研究背景:随着社会的发展和人民生活水平的提高,动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的发病率近年来迅速增加,目前认为,血管内皮损伤和内皮下粥样斑块的形成,是冠状动脉粥样硬化性心脏病(Coronary heart disease,CHD)的病理学基础。他汀类药物(Statins)作为HMGCR的抑制剂,能够有效的降低胆固醇水平,已经被广泛应用于临床动脉粥样硬化的患者。阿托伐他汀钙(Atorvastatin calcium,ATRO)是一种脂溶性强效他汀类药物,但是随着使用的增多,肝损伤、肌肉损伤等不良反应随之被人们发现,尤其是转氨酶(Transaminases)的升高。近年来,人们发现他汀类药物诱发胆红素(Bilirubin)升高,具有抗氧化和心肌保护作用。尽管可能与肝脏损伤相关,但是深入认识他汀类导致胆红素升高的相关因素和可能机制,对他汀类药物的临床应用具有重要意义。我们前期研究发现,Plin5敲除小鼠血中胆红素水平明显升高。但是Plin5在他汀类药物诱发血中胆红素水平升高的具体作用仍有待进一步深入。因此,本研究旨在探讨阿托伐他汀钙对胆红素水平的影响及其相关因素,分析胆红素水平和相关因素之间的关系,并利用Plin5敲除小鼠,探索肝脏脂质代谢异常与胆红素升高的相关机制研究,希望找出阿托伐他汀钙对胆红素影响的可能机制。目的:1、探讨不同剂量阿托伐他汀钙的短期应用,对冠心病患者血清中胆红素水平的影响,并分析胆红素升高水平和转氨酶、体质指数(Body mass index,BMI)等的相关性。确定阿托伐他汀钙导致血清中胆红素水平升高的主要相关因素。2、通过分析他汀类药物对Plin5敲除小鼠肝脏脂质代谢、血清中胆红素水平的影响,确定Plin5在阿托伐他汀钙诱发胆红素水平升高的作用和可能机制。方法:第一部分:1、按照详细的纳入及排除标准,筛选了264例初次服用阿托伐他汀钙的冠状动脉粥样硬化性心脏病患者,按照临床常用的剂量分为20 mg/d和40 mg/d治疗剂量组,观察患者用药前后及高剂量组和低剂量的胆红素水平变化和其他生化指标变化水平。2、按照标准纳入的264例服药患者,进行亚组分析,观察体质指数(BMI)、转氨酶等指标与胆红素水平变化的关系。第二部分:1、使用对照野生型(Plin5+/+)小鼠和Plin5敲除(Plin5-/-)小鼠两组总40只,在小鼠4周龄时开始给予高脂饮食(High fat diet,HFD),喂养时间为8周。在此期间每天监测小鼠摄食情况,每周测体重1次,每周测血糖1次(血糖仪取血检测)。第10周开始两组分别给予10mg/kg/d阿托伐他汀钙混悬液和生理盐水,灌胃10天。2、将小鼠采血送检,测各种血液生化指标。分析各主要器官的重量,取肝脏、心脏、骨骼肌做组织切片,提取蛋白做蛋白印迹(Western blot)检测,对肝脏组织做氧化应激水平检测。确定他汀类药物对Plin5缺失小鼠主要代谢指标的影响。结果:1、与服药前的相比,服用阿托伐他汀钙的患者血清天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(Alamine aminotransferse,ALT)、总胆红素(Total bilirubin,TB)、直接胆红素水平(Direct bilirubin,DB)均显著性升高(P0.05),而间接胆红素(Indirect bilirubin,IB)水平比较差异无显著性;同时,服用40 mg组患者血清AST、ALT、TB、DB水平升高也较服用20 mg患者更为显著(P0.05)。此外,服用阿托伐他汀钙的CHD患者血清中TB升高水平变化,与血清中总胆固醇(Totalcholesterol,TC)水平变化之间具有显著相关性(其20 mg组皮尔森相关分析r值为0.419,40 mg组r值为0.4875,其P值0.0001),但肌酐、尿酸、甘油三酯等水平与TB、DB及IB水平变化无相关性。2、将服药患者,分为BMI≤24和BMI24两组。与服药前相比,服用阿托伐他汀钙的两组患者AST、ALT、胆红素均显著性上升(P0.05)。但是,BMI24组的ALT和TB升高较BMI≤24组更显著(P0.05)。这些结果显示,阿托伐他汀钙导致的血中胆红素水平升高与脂质代谢密切相关。3、阿托伐他汀钙能够减低Plin5敲除小鼠的肝脏重量。同时,与对照相比,阿托伐他汀钙灌胃后小鼠血清中AST、ALT、TB、DB含量均明显升高;且与野生小鼠组相比,Plin5敲除小鼠血清ALT、AST、TB、DB升高更为明显。4、肝脏组织油红O染色结果显示,阿托伐他汀钙能够降低野生小鼠和Plin5敲除小鼠肝细胞中脂滴数目缩小脂滴体积。此外,阿托伐他汀钙能够增加野生型和Plin5敲除小鼠肝脏组织中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和4-羟基壬烯醛(4-Hydroxy-2-Nonenal,4HNE)水平;同时,降低超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性。5、Western blot结果显示,阿托伐他汀钙能够明显降低肝脏Plin5表达水平,但对心脏和骨骼肌Plin5表达降低不明显。同时,阿托伐他汀钙能够进一步增加Plin5敲除小鼠给予灌胃后肝脏过氧化物酶增值体激活受体(Peroxisome proliferation activated receptor-α,PPARα)及其下游分子升高水平。结论:通过对服用阿托伐他汀钙药物患者的临床分析,我们发现阿托伐他汀钙可以升高AST、ALT、TB和DB水平,而且具有明确剂量依赖关系。对其相关因素的分析结果显示,血中胆红素升高水平与总胆固醇变化、体质指数等之间具有明显相关性。这些结果显示,阿托伐他汀钙导致血中胆红素水平的升高与肝脏脂质代谢过程密切相关。阿托伐他汀钙能够降低肝脏Plin5表达水平,且在Plin5缺失小鼠体内,阿托伐他汀钙也能够增加血中胆红素水平,同时进一步激活PPARα,并增加Plin5敲除小鼠肝脏的ROS水平。这些结果表明,阿托伐他汀钙能够降低Plin5表达和激活PPARα,导致血中胆红素水平升高和影响肝脏脂质代谢,Plin5在其过程中发挥重要的作用。本研究有助于我们进一步认识他汀类药物的心血管保护作用机制,为其临床应用提供了研究基础。
【关键词】：阿托伐他汀钙 胆红素 动脉粥样硬化 脂肪储存滴蛋白5
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 缩略语表5-8
• 中文摘要8-12
• ABSTRACT12-16
• 前言16-18
• 文献回顾18-30
• 第一部分 他汀类药物诱发胆红素升高的相关因素分析30-41
• 引言30-31
• 1 实验对象31
• 1.1 研究对象31
• 1.2 病史资料及生化检查31
• 1.3 纳入和排除标准31
• 2 实验方法31-32
• 2.1 血液样本采集和检测31-32
• 2.2 统计学方法32
• 3 结果32-38
• 3.1 基本资料32-34
• 3.2 阿托伐他汀钙对患者主要生化指标的影响34-35
• 3.3 转氨酶水平变化35
• 3.4 血胆红素水平变化的相关因素分析35-38
• 4 讨论38-41
• 第二部分 PLIN5在他汀类药物诱发胆红素升高的作用41-56
• 引言41
• 1 实验材料41-42
• 1.1 实验动物41
• 1.2 主要试剂41-42
• 1.3 主要设备42
• 2 实验方法42-46
• 2.1 小鼠的饲养、繁殖和喂养42
• 2.2 小鼠的基因型鉴定和检测42-43
• 2.3 小鼠高脂饲料喂养43
• 2.4 小鼠的阿托伐他汀钙灌胃43
• 2.5 小鼠体重和主要器官重量分析43
• 2.6 小鼠血液生化主要指标分析43-44
• 2.7 小鼠组织取材44
• 2.8 常规HE染色44
• 2.9 油红O染色44
• 2.10 他汀类药物对小鼠肝脏氧化应激水平的影响44-45
• 2.11 小鼠肝脏Plin5的表达水平检测45-46
• 2.12 统计分析46
• 3 实验结果46-53
• 3.1 Plin5敲除小鼠的基因型鉴定46
• 3.2 小鼠体重检测和重要器官重量的分析46-48
• 3.3 阿托伐他汀钙对小鼠血生化指标的影响48-50
• 3.4 阿托伐他汀钙对小鼠主要器官的形态学影响50-51
• 3.5 阿托伐他汀钙对小鼠肝脏脂肪含量的影响51
• 3.6 阿托伐他汀钙对小鼠肝脏Plin5表达水平的影响51-52
• 3.7 阿托伐他汀钙对小鼠肝脏脂质过氧化相关检测52
• 3.8 阿托伐他汀钙对小鼠肝脏PPARα的影响52-53
• 4 讨论53-56
• 小结56-58
• 参考文献58-64
• 附录 临床规范培训轮转科室64-65
• 个人简历和研究成果65-66
• 致谢66

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本文编号：679431