布洛芬降解菌抗药基因检测及机制初探

发布时间：2017-09-02 09:04

  本文关键词：布洛芬降解菌抗药基因检测及机制初探

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【摘要】：[目的]实验室自污水处理厂分离获得的布洛芬高效降解菌株,本试验旨在研究布洛芬降解菌株的耐药性,筛选抗生素抗性基因,分析其抗性机理,为今后其在布洛芬降解研究中的应用提供依据。[方法]试验采用平板筛选获得菌株对四环素等八种常见抗生素的最大耐受浓度,并通过筛选菌株Fosmid文库获得抗性片段,最终通过PCR检测获得抗生素抗性基因并分析其作用机制。[结果]获得试验菌株对四环素、卡那霉素等八种常见抗生素的最大耐受浓度并筛选获得编码红霉素核糖体甲基化酶的基因ErmB。
【关键词】：布洛芬 克雷伯氏菌 抗生素抗性基因(ARG) 耐药机理
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：Q93;R96
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 文献综述8-12
• 1. 布洛芬8-10
• 1.1 布洛芬8
• 1.2 布洛芬潜在危害8-9
• 1.3 布洛芬降解机制9-10
• 2 细菌耐药性研究10-11
• 2.1 细菌耐药性分类11
• 2.2 细菌耐药性产生原因11
• 3 研究意义11-12
• 第一章 布洛芬高效降解菌株耐药性标记12-26
• 1.1 布洛芬降解菌株耐药性初检12-15
• 1.1.1 供试菌株12
• 1.1.2 试验仪器与试剂12
• 1.1.3 试剂及配制方法12-13
• 1.1.4 试验方法13-14
• 1.1.5 结果与分析14-15
• 1.2 布洛芬高效降解菌I-2 Fomsid文库耐药性筛选15-23
• 1.2.1 菌种15
• 1.2.2 试验仪器与试剂15
• 1.2.3 培养基制备15
• 1.2.4 试验方法15-23
• 1.3 布洛芬高效耐药菌株耐药性标记结果23-26
• 第二章 布洛芬高效降解菌抗生素抗性基因筛选26-34
• 2.1 实验材料26
• 2.2 试验仪器与试剂26-27
• 2.2.1 试验仪器26
• 2.2.2 试剂26
• 2.2.3 试剂配制方法26-27
• 2.3 试验方法27-30
• 2.3.1 菌落PCR检测27-28
• 2.3.2 基因组PCR检测28-29
• 2.3.3 PCR检测29-30
• 2.4 结果与分析30-34
• 2.4.1 菌落PCR30
• 2.4.2 文库大肠杆菌总DNA提取结果30-31
• 2.4.3 PCR抗药性检测结果31-32
• 2.4.4 总结32-34
• 第三章 布洛芬高效降解菌耐药基因ErmB的检测34-44
• 3.1 实验材料34
• 3.2 试验仪器与试剂34
• 3.2.1 试验仪器34
• 3.2.2 主要试剂34
• 3.3 试验方法34-40
• 3.3.1 I-2 菌株DNA及质粒载体DNA的提取34-36
• 3.3.2 ErmB基因酶切位点添加36-37
• 3.3.3 pET-28a及PCR产物DNA的回收（天根胶回收试剂盒）37
• 3.3.4 质粒pET-28a和PCR产物DNA双酶切37-38
• 3.3.5 质粒pET-28a和外源DNA的连接反应38
• 3.3.6 感受态细胞的制备及转化38-39
• 3.3.7 重组质粒鉴定及转化39-40
• 3.4 试验结果40-44
• 3.4.1 I-2 菌株总DNA及质粒载体DNA提取结果40-41
• 3.4.2 ErmB酶切位点添加41
• 3.4.3 转化菌株鉴定41-42
• 3.4.4 重组质粒转化结果42-44
• 第四章 试验总结44-46
• 4.1 布洛芬降解菌株抗性基因筛选结果44-45
• 4.2 红霉素抗性基因ErmB抗性机理45-46
• 参考文献46-50
• 致谢50-52
• 个人简介52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 程洁;张玲玲;黄晓婷;张灿;王师;胡景杰;包振民;;栉孔扇贝Fosmid文库的构建及基因组结构特征分析[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2008年01期

2 王丽平;郑丙辉;孟伟;;环境污染物对水生生物产生氧化压力的分子生物标志物[J];生态学报;2007年01期

3 卫亚红;刘杰;曲东;;布洛芬微生物降解研究进展[J];微生物学报;2011年05期

4 杨晓凡;陆光华;刘建超;闫振华;;环境相关浓度下的药物对大型蚤的多代慢性毒性[J];中国环境科学;2013年03期

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本文编号：777601