化合物H057镇静催眠作用机制研究

发布时间：2017-09-09 23:19

  本文关键词：化合物H057镇静催眠作用机制研究

  更多相关文章： 镇静催眠 H057 自主活动 高效液相-电化学 微透析 γ氨基丁酸 单胺类神经递质 囊泡单胺转运体2

【摘要】：本科室与北京协和医学院药物研究所药化室张纯贞研究员课题组合作,从一系列哌嗪类化合物中定向筛选出化合物H057,其结构新颖且具有较强的镇静催眠作用。本论文旨在对H057的镇静催眠作用进行药效学评价,并对其机制进行初步探索。腹腔注射H057(≥5mg/kg)5min后,即可观察到小鼠出现明显的镇静现象。给药15 min后,利用开场实验测定小鼠自主活动。结果表明,H057(5和25 mg/kg, i.p.)能显著抑制小鼠的自主活动,抑制率分别为25%和66%。腹腔注射H057(≥60mg/kg)能直接诱导100%小鼠翻正反射消失,60 mg/kg和80 mg/kg组小鼠睡眠潜伏期分别为(24±11)min和(20±7)min,睡眠时间分别为(96±±15)min和(124+64)min。协同阈下剂量戊巴比妥钠实验结果显示,H057能显著增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠的入睡率,5 mg/kg和25 mg/kg组小鼠的入睡率分别增加为87.5%和100%。同时,直接经侧脑室给予H057 (20 μg,1 min/只),也能引起小鼠翻正反射消失,显示H057能够以原型起效。以上实验结果表明H057具有显著的镇静催眠作用。通过悬挂实验测试H057对小鼠肌张力的影响,结果发现给药40 min后,溶剂对照组小鼠全部能悬挂于绳上超过1 min,10 mg/kg和20mg/kg组小鼠只有1/2能悬挂于绳上超过1 min。测定给予H057前后不同时间点小鼠的肛温,结果显示H057(5和10 mg/kg, i.p.)能分别引起小鼠体温下降0.9℃和1.8℃。摄食实验结果显示,H057 (25 mg/kg, i.p.)给药16小时内对小鼠摄食的抑制率为26%。通过合并给予GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱,测定小鼠自主活动以检测荷包牡丹碱对H057镇静作用的影响。实验结果表明,荷包牡丹碱不能拮抗H057对小鼠自主活动的抑制作用。利用印防己毒素、戊四唑和NMDA诱导小鼠致惊厥模型,来评价H057对小鼠惊厥潜伏期的影响。实验结果显示,H057 (20 mg/kg, i.p.)对印防己毒素和NMDA诱导小鼠惊厥的潜伏期有显著延长作用,惊厥潜伏期分别延长51%和500%。采用高效液相-电化学检测法测定H057对小鼠大脑皮层、纹状体、下丘脑和海马脑匀浆中抑制性氨基酸GABA含量的影响。结果表明,H057对不同脑区脑匀浆中GABA含量无显著影响。应用微透析技术在体动态监测H057对大鼠大脑皮层细胞外液GABA含量的影响。实验结果显示H057能显著升高大脑皮层细胞外液GABA水平,给药后10min升高26%。采用离体孵育脑片的方法测定H057对小鼠大脑皮层和下丘脑细胞外液GABA含量的影响。结果显示H057 (10-5moL/L)能显著升高下丘脑和大脑皮层细胞外液GABA水平,分别升高了160%和130%。前期研究发现H057能显著抑制小鼠的摄食,因此,我们推测H057发挥镇静催眠作用可能跟Orexin能神经系统相关。通过评价侧脑室注射Orexin受体激动剂Orexin A对H057 (80 mg/kg, i.p.)诱导小鼠睡眠时间的影响,我们发现侧脑室注射Orexin A (0.10、0.15和0.20 nmol, i.c.v..)能剂量依赖性的缩短H057诱导小鼠的睡眠持续时间,各剂量组的缩短率为37%、55%和95%。同时,我们发现H057 (80mg/kg, i.p.)不能引起预先侧脑室注射Orexin A的小鼠翻正反射消失。以上两个实验结果提示H057可能是Orexin受体的拮抗剂。Orexin主要通过激活单胺能神经系统来促进觉醒。采用高效液相-电化学检测法测定H057对小鼠大脑皮层、纹状体、下丘脑和海马脑匀浆中单胺神经递质含量的影响。结果表明,H057能显著降低小鼠纹状体内DA和下丘脑内NE的含量,分别降低了43%和28%。应用微透析技术在体实时动态监测H057对大鼠大脑皮层细胞外液单胺神经递质含量的影响。结果显示H057能显著降低大鼠大脑皮层细胞外液的NE和5-HT水平,分别降低38%和50%。采用离体孵育脑片的方法测定H057对小鼠大脑皮层和下丘脑细胞外液单胺神经递质含量的影响。实验结果表明H057(10"5 moL/L)能降低两个脑区的DA和5-HT水平,大脑皮层分别降低80%和64%,下丘脑分别降低79%和66%。我们利用荧光假神经递质FFN102标记DA神经元来测定H057是否对单胺囊泡转运体2 (VMAT2)有抑制作用。结果发现H057能显著性降低FFN102的荧光强度,推测H057对VAMT2可能有抑制作用。以上结果提示,化合物H057发挥镇静催眠作用的可能通路为：1)H057能够拮抗Orexin受体,阻断Orexin神经元对单胺神经的激活,降低单胺神经递质水平；2)Orexin能神经系统对单胺能神经系统的抑制使GABA能神经系统间接激活,增加了细胞外液的GABA含量；3)H057能够抑制VMAT2的活性,破坏DA的储存,降低DA的水平。
【关键词】：镇静催眠 H057 自主活动 高效液相-电化学 微透析 γ氨基丁酸 单胺类神经递质 囊泡单胺转运体2
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英文缩略词表(ABBREVIATION)10-12
• 前言12-20
• 实验材料与方法20-30
• 实验结果30-51
• 一、化合物H057镇静催眠作用药效学评价30-37
• 1. 化合物H057对小鼠自主活动的影响30-31
• 2. 化合物H057直接诱导小鼠翻正反射消失31-32
• 3. 化合物H057能增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠入睡率的影响32
• 4. 侧脑室注射化合物H057直接诱导小鼠睡眠32-33
• 5. 化合物H057对小鼠肌张力的影响33
• 6. 化合物H057对小鼠体温的影响33-35
• 7. 化合物H057对小鼠摄食的影响35-36
• 小结一36-37
• 二、化合物H057对脑内GABA能神经系统的影响37-43
• 1. GABA_A受体拮抗剂荷包牡丹碱对化合物H057镇静作用的影响37-38
• 2. 化合物H057对致惊剂诱导小鼠惊厥的保护作用38-39
• 3. 化合物H057对不同脑区GABA含量的影响39-40
• 4. 在体条件下，化合物H057对大鼠大脑皮层细胞外液GABA含量的影响40-41
• 5. 离体条件下，化合物H057对小鼠下丘脑和大脑皮层细胞外液GABA含量影响41-42
• 小结二42-43
• 三、化合物H057对脑内Orexin能神经系统的影响43-51
• 1. Orexin受体激动剂Orexin A对H057诱导小鼠睡眠时间的影响43-44
• 2. 化合物H057对小鼠离体脑匀浆中单胺神经递质含量的影响44-45
• 3. 在体条件下，，化合物H057对大鼠大脑皮层细胞外液单胺神经递质含量的影响45-46
• 4. 离体条件下，化合物H057对小鼠下丘脑和大脑皮层细胞外液单胺含量的影响46-47
• 5. 化合物H057对纹状体和大脑皮层单胺氧化酶活性的影响47
• 6. 化合物H057能抑制单胺囊泡转运体2(VMA17)的活性47-50
• 小结三50-51
• 讨论51-57
• 结论57-58
• 参考文献58-63
• 综述63-71
• 参考文献68-71
• 致谢71-73
• 个人简历73-74

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本文编号：823351