重组人纤维蛋白原基因在毕赤酵母中的高效表达

发布时间：2017-09-12 10:38

  本文关键词：重组人纤维蛋白原基因在毕赤酵母中的高效表达

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【摘要】：目的构建含有人纤维蛋白原基因的毕赤酵母表达系统,实现胞外高效分泌表达。方法全基因合成人纤维蛋白原3个基因FGA、FGB、FGG,构建表达载体pGAPZαA-FGB-FGG-FGA-AOX1,线性化后电转化导入毕赤酵母菌株SMD1168H,抗性筛选获得阳性克隆。发酵液经SDS-PAGE确定蛋白表达部位,ELISA检测目的蛋白表达量。表达产物超滤浓缩后利用AKTA蛋白纯化系统进行分离纯化,Western blot检测蛋白表达情况并对纯化产物进行生物学活性测定。结果基因工程菌株摇瓶培养上清液表达量约15mg/L,生物学活性分析重组蛋白具有凝集活性。结论成功获得了高效分泌表达重组人纤维蛋白原的毕赤酵母菌株,且分离纯化的蛋白具有生物凝集活性。
【作者单位】： 山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室山东省多糖类药物工程实验室多糖类药物发酵与精制国家地方联合工程实验室;山东大学药学院;山东福瑞达医药集团公司;
【关键词】： 重组人纤维蛋白原 毕赤酵母 分泌表达 分离纯化
【基金】：山东省自主创新成果转化专项(2014CGZH1306) 济南市自主创新产业化重大专项(201403009) 山东省重点研发计划(2015GSF121003) 山东省科技重大专项(重大关键技术)(2015ZDJS04002) 山东省自然科学基金企业先导技术联合基金(ZR2015QL007)
【分类号】：R915
【正文快照】： (1.山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室山东省多糖类药物工程实验室多糖类药物发酵与精制国家地方联合工程实验室,山东济南250101;2.山东大学药学院,山东济南250012;3.山东福瑞达医药集团公司,山东济南250101)(1.Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences,Key Labo

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本文编号：836743