人MB-MSCs保护表柔比星致卵巢颗粒细胞损伤的实验研究

发布时间：2017-09-24 10:22

  本文关键词：人MB-MSCs保护表柔比星致卵巢颗粒细胞损伤的实验研究

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【摘要】：目的:分离培养GCs,探讨表柔比星致GCs损伤的机制的研究;分离培养MB-MSCs,并体外扩增、鉴定;应用分离培养出的MB-MSCs与表柔比星诱导凋亡的GCs共培养,以观察MB-MSCs对GCs凋亡的保护情况。探讨MB-MSCs对表柔比星致GCs损伤的修复作用,为干细胞治疗化疗损伤性卵巢早衰提供理论依据。方法:应用密度离心法分别培养GCs、MB-MSCs;应用FSHR细胞免疫组织化学染色鉴定GCs;应用流式细胞术鉴定MB-MSCs的表面标记物;油红O染色、碱性磷酸酶染色、阿尔辛兰染色检测其成脂、成骨、成软骨能力;采用ELISA检测分析MB-MSCs的VEGF、IGF-1、HGF分泌水平;为检测表柔比星对GCs的影响及MB-MSCs是否对表柔比星作用的GCs损伤有修复作用,实验分3组,Control组,GCs;G+E组,GCs加0.025 mg/ml表柔比星;G+E+M组,GCs加0.025 mg/ml表柔比星再与MB-MSCs共培养。使用Transwell小室实现G+E+M组GCs与MB-MSCs间共培养。分别干预48小时后,应用倒置显微镜观察GCs形态学变化。应用流式细胞仪采用Annexion v和7AAD对GCs凋亡率进行检测。El ISA检测分析GCs的E2、孕激素、AMH、抑制素A、抑制素B分泌水平。结果:应用密度梯度离心法成功的分离培养GCs、MB-MSCs;FSHR免疫组织化学染色结果示GCs胞膜和胞质呈棕色着染;流式细胞仪结果示MB-MSCs高表达CD45、CD31、CD44、CD29、CD105、CD73,不表达CD31、CD45;油红O染色、碱性磷酸酶染色、阿尔辛兰染色阳性;MB-MSCs可以分泌VEGF(4.926.938±0.890.475 ng/ml);HGF(122.953±4.377 pg/ml);IGF-1(1.77±0.027ng/ml)这3种抗凋亡因子。表柔比星可引起GCs凋亡,与对照组相比,G+E组浓度为0.025 mg/ml表柔比星作用GCs后,GCs凋亡率由4.58%增加至36.14%,然而在G+B+M组使用浓度为0.025 mg/L表柔比星作用GCs 24h后与MSCs共培养后发现,GCs凋亡率减少至27.24%,而细胞存活率上升至71.7%。其中早期细胞凋亡率(32.40±7.21%),晚期细胞凋亡率(16.61±8.11%)较Control组(2.18±2.042%)(6.29±0.260%)均明显增加(P0.05)。ELISA结果示0.025mg/ml表柔比星作用GCs24h后,GCs分泌的激素E2,孕激素,AMH抑制素A和抑制素B与Control组相比均减少,而与MB-MSCs共培养后,GCs分泌E2、孕激素、AMH、抑制素A、抑制素B激素的水平与Control组相比,明显增加(P0.05),差异有统计学意义。结论:应用密度梯度离心法成功地分离培养出GCs、MB-MSCs。表柔比星可诱导GCs凋亡,且MB-MSCs可对化疗药物表柔比星诱导的GCs凋亡可起保护作用。其机制MB-MSCs可能通过分泌抗凋亡因子减少GCs凋亡。
【关键词】：化疗损伤性卵巢早衰 月经血 子宫内膜间充质干细胞 表柔比星
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-16
• 研究现状、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、表柔比星致人卵巢颗粒细胞损伤的机制的研究16-33
• 1.1 对象和方法16-22
• 1.1.1 实验材料16-17
• 1.1.2 实验方法17-22
• 1.1.3 统计学处理22
• 1.2 结果22-28
• 1.2.1 卵巢颗粒细胞的分离与鉴定22-23
• 1.2.2 表柔比星浓度的确定23-25
• 1.2.3 卵巢颗粒细胞凋亡的测定结果25-27
• 1.2.4 表柔比星处理后卵巢颗粒细胞激素的测定结果27-28
• 1.3 讨论28-32
• 1.3.1 蒽环类抗生素的应用28-29
• 1.3.2 蒽环类抗生素对卵巢功能的损伤29
• 1.3.3 蒽环类抗生素致卵巢功能损伤的机制29
• 1.3.4 表柔比星致卵巢颗粒细胞损伤机制的研究29-31
• 1.3.5 卵巢早衰储备功能的评价31-32
• 1.4 小结32-33
• 二、经血源性子宫内膜间充质干细胞的分离培养与鉴定33-51
• 2.1 对象和方法33-42
• 2.1.1 实验材料33-35
• 2.1.2 实验方法35-42
• 2.2 结果42-47
• 2.2.1 MB-MSCs的分离与培养42-43
• 2.2.2 MB-MSCs细胞表面标记物的检测43-44
• 2.2.3 MB-MSCs的分化功能44-46
• 2.2.4 MB-MSCs的分泌功能46
• 2.2.5 MB-MSCs的增殖能力46-47
• 2.3 讨论47-50
• 2.3.1 干细胞的分类47-48
• 2.3.2 MB-MSCs的分离、培养与鉴定48-49
• 2.3.3 MB-MSCs的增殖及分泌能力49-50
• 2.4 小结50-51
• 三、经血源性间充质干细胞保护卵巢颗粒细胞的体外研究51-62
• 3.1 对象和方法51-55
• 3.1.1 实验材料51-52
• 3.1.2 实验方法52-54
• 3.1.3 统计学处理54-55
• 3.2 结果55-58
• 3.2.1 卵巢颗粒细胞形态学变化55
• 3.2.2 卵巢颗粒细胞凋亡的测定结果55-57
• 3.2.3 卵巢颗粒细胞分泌激素的测定结果57-58
• 3.3 讨论58-61
• 3.3.1 干细胞治疗疾病的应用58-59
• 3.3.2 MB-MSCs对表柔比星致卵巢功能损伤的保护作用59-61
• 3.4 小结61-62
• 结论62-63
• 参考文献63-70
• 发表论文和参加科研情况说明70-71
• 综述71-85
• 综述参考文献81-85
• 致谢85-86
• 个人简历86

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 宋阿霞;杨栋林;魏嘉t，

本文编号：910871