重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体质控方法与质量标准的建立

发布时间：2017-10-02 20:15

  本文关键词：重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体质控方法与质量标准的建立

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【摘要】：目的建立重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体的质控方法和质量标准。方法利用乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制试验测定重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体的生物学活性;RP-HPLC和SECHPLC测定其纯度;胰酶酶切,HPLC测定其肽图;荧光定量PCR检测E.coli宿主DNA残留量;ELISA法测定宿主蛋白残留量;Edman降解法进行N-末端序列测定;水平等电聚焦电泳法测定等电点;其余检测项目按《中国药典》三部(2010版)规定进行。同时对通常在原液中进行检定的宿主DNA残留、菌体蛋白残留、N-末端序列测定进行初步的方法验证,考察其在成品中进行检测的可行性。结果经初步验证,在成品中进行宿主DNA残留、菌体蛋白残留、N-末端序列测定具有可行性,用建立的方法对重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体成品进行检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部(2010版)的要求。结论建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。同时只对成品进行质控的方法和质量标准对同类产品的质量控制具有借鉴意义。
【作者单位】： 中国食品药品检定研究院重组药物室;
【关键词】： 重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体 质量控制 生物学活性
【基金】：863计划项目(2012AA020805) 国家科技重大专项项目(2012ZX09304010)
【分类号】：R927
【正文快照】： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosisfactor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)是肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)超家族成员之一,其c DNA编码全长为281个氨基酸的前体蛋白,其中第114~281位氨基酸为其可溶性片段。TRAIL能够选择性诱导肿瘤细胞凋亡,

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本文编号：961591