三氯乙烯经皮致敏对小鼠Th17细胞影响的研究
本文关键词: 三氯乙烯 Th17细胞 细胞因子 IL-17IL-6TGF-β 出处:《安徽医科大学》2012年硕士论文 论文类型:学位论文
【摘要】:目的通过检测和比较不同组别和不同时点三氯乙烯经皮致敏小鼠体内Th17细胞的数量、其分泌的细胞因子IL-17和促Th17细胞产生的细胞因子IL-6表达情况,探讨Th17细胞及相关细胞因子在TCE致敏中的作用,研究三氯乙烯药疹样皮炎皮肤损伤的新机制。 方法选用6~8周的雌性Balb/c小鼠作为试验对象,经适应性饲养5~7天后,选用25g左右的健康小鼠进入实验队列,根据实验目的将动物随机分成空白对照(5只)和TCE实验组(75只,其中1d组,2d组,3d组,,7d组和14d组各15只)。每日称量小鼠体重,观察小鼠健康状态;参考豚鼠最大反应试验(Guinea Pig Maximization Test,GPMT)方法建立小鼠的致敏模型;依据《化学品毒性鉴定技术规范》(卫监督【2005】272号)观察和记录小鼠背部皮肤反应情况并对皮肤反应进行评分,当受试动物反应积分≥1时,判断为皮肤致敏反应阳性,该动物即被划为致敏组,其余则为未致敏组。分别在皮肤激发后1d、2d、3d、7d和第14d眼静脉丛采血并制备血清用于ELISA试剂盒检测血清中IL-17和IL-6细胞因子的表达水平,处死动物后取脾脏制成细胞悬液采用流式细胞术测定脾细胞悬液中Th17细胞的数量和比例,皮肤组织用于观察病理和免疫组化实验测定皮肤组织中IL-17和IL-6的表达。用SPSS13.0统计软件对实验结果进行统计分析。 结果 1.致敏率参考豚鼠最大值试验建立小鼠TCE致敏模型,空白对照组未见到皮肤红斑或水肿,TCE实验组小鼠可见到皮肤损伤,本次实验条件下,小鼠的致敏率为36%; 2.皮肤病理空白对照组小鼠皮肤组织中未见粒细胞浸润和表皮层增厚等炎症反应;致敏组小鼠可见明显的皮肤炎症改变,表皮层增厚,真皮、毛囊周围水肿,坏死,有大量中性粒细胞、炎细胞浸润。 3..小鼠脾细胞悬液Th17细胞检测结果与空白对照组相比,2d致敏组、3d致敏组小鼠Th17细胞数量明显升高,且差异有统计学意义;与1d致敏组相比,2d致敏组和3d致敏组小鼠Th17细胞数量也明显升高,差异有统计学意义;与2d致敏组相比,7d致敏组和14d致敏组的细胞数量降低,差异有统计学意义;与3d致敏组相比,7d致敏组和14d致敏组相比细胞数量同样降低,差异有统计学意义。 4.血清中IL-17检测结果1d、2d及3d致敏组血清中IL-17的表达结果均高于空白对照组,且差异有统计学意义;与1d致敏组相比,7d致敏组和14d致敏组的表达水平降低,差异有统计学意义;与2d致敏组相比,2d未致敏组、7d致敏组和14d致敏组血清中IL-17表达水平降低,差异有统计学意义;与3d致敏组相比,3d未致敏组、7d致敏组和14d致敏组血清中IL-17表达水平降低,差异有统计学意义。 5.皮肤组织中IL-17表达结果1d、2d及3d致敏组皮肤组织中IL-17的表达结果均高于空白对照组,且差异有统计学意义;与1d致敏组相比,3d致敏组和7d致敏组的表达结果升高,差异有统计学意义;与2d致敏组相比,2d未致敏组的表达水平明显降低,差异有统计学意义,而3d致敏组的水平上升,差异有统计学意义;与3d致敏组相比,3d未致敏组和7d致敏组皮肤组织中IL-17的表达水平降低,差异具有统计学意义;7d致敏组与7d未致敏组之间比较,未致敏组表达水平降低,差异有统计学意义。 6.血清中IL-6检测结果与空白对照组相比,1d、2d、3d及1w致敏组小鼠血清中IL-6的表达水平上升,差异有统计学意义;与1d致敏组相比,1d未致敏组和2d、3d、1w致敏组小鼠血清IL-6的表达差异有统计学意义;与2d致敏组相比,2d未致敏组及3d、1w、2w致敏组的表达水平差异有统计学意义;与3d致敏组相比,3d未致敏组及2w致敏组IL-6的表达水平降低,差异有统计学意义;1w未致敏组和2w致敏组的表达水平也低于1w致敏组,差异有统计学意义。 7.皮肤组织中IL-6表达结果2d、3d及7d致敏组皮肤组织中IL-6的表达结果高于空白对照组,差异有统计学意义;3d致敏组皮肤组织中IL-6的表达高于1d致敏组,且差异有统计学意义;与2d致敏组相比较,2d未致敏组和2w致敏组皮肤IL-6的表达降低,差异有统计学意义;与3d致敏组相比较,3d未致敏组及2w未致敏组皮肤组织IL-6表达降低,差异有统计学意义;1w未致敏组与1w致敏组比较,IL-6的表达有差异,差异有统计学意义。 结论 1.TCE对小鼠有致敏作用,在本次试验中,致敏率为36%。 2.Th17细胞及其相关的细胞因子IL-17、IL-6等参与TCE皮肤致敏反应,可能在致敏过程中发挥作用,并在三氯乙烯药疹样皮炎中有重要意义。
[Abstract]:......
【学位授予单位】:安徽医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R135
【参考文献】
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本文编号:1479057
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