基于MAPK通路探讨PAS-Na对铅诱导体外培养PC12细胞凋亡的影响

发布时间：2018-05-13 04:41

  本文选题：铅 + 对氨基水杨酸钠　； 参考：《广西医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的研究主要探讨铅诱导体外培养PC12细胞损伤、凋亡相关基因与蛋白表达的影响,以及对氨基水杨酸钠(PAS-Na)的干预作用效果。方法PC12细胞经过对数代培养,分别(1)经0、1、10、100、1000μmol·L-1五个浓度梯度的醋酸铅单独作用24h,(2)单独给予0、5、50、100、500μmol·L-1五个浓度梯度的PAS-Na作用24h,用倒置相差显微镜观察PC12细胞的形态,使用MTT法测定各个组的细胞存活率。(3)PC12细胞被随机分为正常对照组、铅模型组、醋酸铅+ PAS-Na 20,100和500μmol·L-1剂量干预组。正常对照组和正常+PAS-Na500 μmol·L-1组细胞于正常培养液中培养24 h后弃培养液,前者加入正常培养液、后者加入PAS-Na继续培养24 h。醋酸铅模型组及醋酸铅+ PAS-Na 20,100和500μmol·L-1组先与醋酸铅(终浓度10μmol·L-1)共培养24h后弃培养液,再加入相应浓度PAS-Na继续培养24 h。用MTT法测定细胞存活率,试剂盒方法测定细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量,Hoechst33342荧光染色及AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测PC12细胞早期凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法测定P53、Caspase-3、Caspase-9和MAPK14mRNA表达量,蛋白免疫印迹法(WB)测定 P53、Bax、Bcl-2、Capsase-3、Caspase-9 及 MAPK 通路的 T-/P-JNK、T-/P-ERK、T-/P-P38 蛋白表达。结果(1)铅可引起PC12细胞的形态损伤及存活率呈剂量-反应性下降。(2)高浓度(5000μmol·L-1)PAS-Na可使PC12细胞存活率降低,其它剂量组的存活率与对照组无差异。(3)铅模型组PC12细胞皱缩、突起稀少。与正常对照组比较,醋酸铅模型组细胞存活率降低(P0.05),细胞凋亡形态变化典型、细胞凋亡率增高(P0.05)、细胞内GSH含量降低(P0.05),P53、Caspase-3、Caspase-9 和 MAPK14mRNA 表达均升高,差异有统计学差异(P0.05),P53、Bax、activated Capsase-3、activated Caspase-9和p-JNK蛋白表达均升高,p-ERK和Bcl-2表达下降;正常+PAS-Na500μmol·L-1组上述指标未见明显变化。(4)与醋酸铅模型组比较,醋酸铅+PAS-Na 100和500 μmol·L-1组PC12细胞存活率增高和细胞凋亡率降低(P0.05),各PAS-Na干预组细胞内GSH含量增高(P0.05),PAS-Na干预或治疗对上述铅诱导改变的基因均有不同程度的下调,其中醋酸铅+PAS-Na 100 和 500 μml·L-组 P53、Caspase-3、Caspase-9 和 MAPK14 mRNA表达改变下调较为明显(P0.05)。PAS-Na干预可不同程度的上调p-ERK和 Bcl-2 表达、下调 P53、Bax、activated Capsase-3、和 p-JNK 蛋白表达白水平,但对activated Caspase-9和P38蛋白的表达影响不大。结论(1)铅暴露引起PC12细胞存活率和凋亡率降低,PAS-NA对铅致PC12细胞存活率下降和细胞凋亡增加有一定的保护作用。(2)铅暴露会降低PC12细胞内GSH含量,PAS-Na对铅致PC12细胞内GSH含量降低具有一定的拮抗作用。(3)铅暴露引起 PC12 细胞 P53、Caspase-3、Caspase-9 和 MAPK14 mRNA 表达水平升高。PAS-Na 对铅致 P53、Caspase-3、Caspase-9 和 MAPK14 mRNA表达水平升高有一定的治疗性干预作用。(4)铅可能通过MAPK通路中的JNK、ERK途径参与细胞凋亡,以激活JNK磷酸化并降低ERK活性;铅也可通过上调P53、降低Bax/Bcl-2比率,并且激活Caspase-9和Caspase-3,从而导致细胞凋亡。PAS-Na干预对MAPK通路和凋亡相关蛋白改变有一定的拮抗作用。
[Abstract]:The apoptosis rate of PC12 cells was determined by MTT assay , and the survival rate of PC12 cells was determined by MTT assay . ( 4 ) Compared with the normal control group , the survival rate of PC12 cells decreased ( P0.05 ) , the expression of P53 , Bax , activated Capsase - 3 , activated Caspase - 9 and p38 protein decreased significantly ( P0.05 ) . ( 2 ) Lead exposure can decrease the GSH content in PC12 cells , and PAS - Na has an antagonistic effect on the decrease of GSH content in PC12 cells . ( 4 ) The expression of P53 , Caspase - 3 , Caspase - 9 and MAPK14 mRNA in PC12 cells is increased by PAS - Na .

【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R114

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本文编号：1881734