【摘要】：目的本研究通过建立氟染毒大鼠模型,探讨氟暴露致生殖损伤的内质网应激效应,评估氟对生殖系统的影响及氟化钠和N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)的联合作用对内质网应激的效果,为氟致雄性生殖损伤的毒作用机制及防治措施提供新的思路。方法1.动物分组和处理60只4周龄SPF级的SD雄性大鼠,体重为100~140g,随机分为4组,分别为生理盐水对照组、NAC组、NaF组和NAC+NaF组,每组15只。对应各组给予的溶液及剂量为:0.9%氯化钠溶液、150mg/kg/d NAC溶液、25mg/kg/d NaF溶液、先灌胃150mg/kg/d NAC溶液,半小时后再灌胃25mg/kg/d NaF溶液,均以经口灌胃方式染毒,每周连续灌胃6天,停灌1天,时间为7周。2.生殖损伤效应相关指标的检测称量睾丸和附睾重量,计算其对应的脏器系数,并用氟离子选择电极测定睾丸组织氟含量,ELISA法检测血清睾酮、卵泡刺激素和促黄体生成素含量,TUNEL法检测大鼠睾丸细胞凋亡情况。3.内质网应激相关指标的检测q-PCR法测定各组大鼠睾丸中IRE1及下游因子XBP1和JNK的mRNA表达水平。Western Blot法检测各组大鼠睾丸中GRP78、IRE1、p-IRE1、XBP1u、XBP1s、JNK和p-JNK蛋白表达水平。结果1.雄性生殖功能效应指标结果与对照组相比,NaF组和NAC+NaF组睾丸氟含量都明显升高,差异有统计学意义(P0.05),NaF组大鼠体重、睾丸和附睾湿重均下降,差异有统计学意义(P0.05),但各组睾丸和附睾脏器系数间无差异;ELISA检测血清生殖激素水平,结果显示,与对照组相比,NaF组和NAC+NaF组血清睾酮含量降低,差异有统计学意义(P0.05),NaF组和NAC+NaF组血清卵泡刺激素和促黄体生成素含量升高,差异有统计学意义(P0.05),NAC+NaF组与NaF组相比,血清卵泡刺激素和促黄体生成素含量降低,差异有统计学意义(P0.05)。2×2析因方差分析结果显示,NaF和NAC的交互作用对FSH和LH含量的影响,差异有统计学意义(P0.05)。2.细胞凋亡分析结果TUNEL法检测细胞凋亡结果发现,与对照组相比,NaF组和NAC+NaF组睾丸组织细胞凋亡指数升高,差异有统计学意义(P0.01),与NaF组相比,NAC+NaF组细胞凋亡指数下降,差异有统计学意义(P0.01)。3.内质网应激相关因子基因蛋白表达结果q-PCR检测内质网应激相关因子mRNA的表达水平,与对照组相比,氟暴露明显上调了大鼠睾丸IRE1、XBP1和JNK的mRNA表达量,差异有统计学意义(P0.01),与NaF组相比,NAC联合NaF作用处理降低IRE1、XBP1和JNK的mRNA表达量,差异有统计学意义(P0.01)。析因方差分析结果显示,NaF和NAC的交互作用对IRE1、XBP1和JNK的mRNA表达量的影响,差异有统计学意义(P0.05)。Western Blot检测相关蛋白表达水平结果显示,与对照组相比,NaF组的GRP78、XBP1s和p-JNK蛋白表达均明显升高,差异有统计学意义(P0.01),另外,NaF组及NAC+NaF组的p-IRE1蛋白表达均明显上调,差异有统计学意义(P0.05)。与NaF组相比,NAC联合作用后明显抑制了GRP78、XBP1s和p-JNK蛋白表达水平的上调,差异有统计学意义(P0.01)。析因方差分析结果显示,NAC和NaF的交互作用对GRP78、p-IRE1、XBP1s和p-JNK蛋白表达的影响均有统计学意义(P0.05)。结论1、NaF可诱导雄性大鼠生殖系统发生损伤,可能是激活了内质网应激IRE1-XBP1通路及其介导的JNK凋亡信号通路。2、NAC可能拮抗内质网应激反应,同时抑制大鼠生殖细胞发生凋亡从而保护雄性生殖系统。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R114
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本文编号：2385739
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