壬基酚对雌性SD大鼠免疫系统功能影响的研究

发布时间：2019-03-08 18:33

【摘要】：目的：壬基酚(nonyl phenol，NP)，又称壬基苯酚，常温下为无色或淡黄色液体，略带苯酚气味，几乎不溶于水，溶于丙酮，是一种重要的精细化工原料和中间体，主要用于生产表面活性剂、也用于抗氧剂、纺织印染助剂、润滑油添加剂、农药乳化剂、树脂改性剂、树脂及橡胶稳定剂等领域。NP是有代表性的环境内分泌干扰物，其对生物体产生的不良作用包括影响内分泌、影响生殖和发育、影响免疫及促癌作用等。目前，国内外对壬基酚毒性作用的研究主要集中于探讨其对生殖系统造成的损伤及其机制，而关于壬基酚对免疫系统毒性影响方面的研究较少，且尚无壬基酚对生殖免疫影响的报道。本课题通过研究壬基酚慢性染毒对雌性SD大鼠脾脏、胸腺组织及其淋巴细胞的损伤作用，并同时检测大鼠血清IFN-γ、IL-4含量和脾脏、胸腺、外周血NK、NKT细胞水平，探讨壬基酚对雌性大鼠免疫系统功能的影响，并初步探讨壬基酚致机体免疫系统功能损伤的可能机理，为进一步探索壬基酚致机体免疫损伤的机制提供科学依据。方法：选用32只健康8～9周龄SPF级雌性SD大鼠，适应性喂养一周后，按体重随机分为溶剂对照组（玉米油）和低（20mg/kg）、中（80mg/kg）、高（200mg/kg）剂量壬基酚染毒组，每组8只。采用灌胃方式进行染毒，灌胃容量5ml/kg，隔天染毒1次，连续60d。（1）体重和一般情况观察隔天称1次体重，密切观察各组动物的一般状况变化，如被毛、粪便、行为、精神状态等；（2）大鼠处死后，腹主动脉采血，2h内进行动态血常规检测，观察外周血血液参数改变；（3）苏木精-伊红（Hematoxylin and Eosin，HE）染色，观察各组间胸腺、脾脏组织病理学改变；（4）腹主动脉取血，离心分离血清，采用酶联免疫间接法测定大鼠血清IFN-γ、IL-4的相对含量；（5）用荧光标记的抗体进行染色，流式细胞仪检测胸腺、脾脏、外周血NK、NKT细胞含量；（6）采用流式细胞术，通过相应的荧光探针检测不同浓度NP处理组大鼠脾脏、胸腺淋巴细胞内活性氧（ROS）（用荧光探针DCFH_2DA）、游离钙离子（[Ca~(2+)]i）浓度（用荧光探针Fluo-3AM）、线粒体膜电位（MMP）（用荧光探针JC-1）水平的变化；（7）采用流式细胞仪，通过碘化丙啶（PI）染色观察不同NP染毒组间脾脏、胸腺淋巴细胞细胞周期和凋亡率的变化。结果：（1）随NP染毒剂量增加，大鼠体重呈下降趋势，差异有统计学意义（P0.05），存在剂量-效应关系（r=-0.532，P0.05）；与溶剂对照组比较，高剂量NP染毒组大鼠的胸腺、脾脏重量下降明显，而中、低剂量组胸腺、脾脏重量无明显变化；但各组大鼠胸腺、脾脏系数间比较，差异无统计学意义；（2）血液学指标检测结果显示，与对照组比较，高浓度NP染毒组大鼠外周血白细胞数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞比率明显升高，淋巴细胞比率、嗜酸性粒细胞比率明显降低，差异有统计学意义（P0.05）；各组大鼠外周血红细胞计数、血小板计数无明显变化；高浓度NP染毒组血红蛋白含量略高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）；（3）病理学检查可见，与对照组相比，，中、高剂量壬基酚染毒组脾脏白髓减少，脾窦内血管扩张充血。各组胸腺均未见明显病理改变；（4）流式细胞术检测结果显示，随NP染毒剂量增加，外周血中NK、NKT细胞呈上升趋势，与对照组相比，高剂量染毒组外周血NK、NKT细胞含量升高明显，有统计学意义（P0.05）；各组间胸腺、脾脏NK、NKT细胞水平无明显变化；(5)与对照组相比，高剂量组大鼠的血清IFN-γ、IL-4含量明显减少(P0.05)，而低剂量组和中剂量组均无明显变化（P0.05）。各组间IFN-γ/IL-4无明显改变；(6)流式细胞术检测结果显示，与溶剂对照组相比，中、高剂量壬基酚染毒组大鼠脾淋巴细胞内ROS水平和高剂量壬基酚染毒组脾淋巴细胞内[Ca~(2+)]i水平明显升高，高剂量壬基酚染毒组脾淋巴细胞内MMP水平明显降低，差异均有统计学意义(P0.05)，且脾淋巴细胞内ROS、[Ca~(2+)]i水平与壬基酚浓度呈正相关（ROS：r=0.488，P0.05；[Ca~(2+)]i：r=0.497，P0.05），MMP水平与壬基酚浓度呈负相关（r=-0.565，P0.05）。高剂量壬基酚染毒组胸腺淋巴细胞内ROS水平升高明显(P0.05)，[Ca~(2+)]i、MMP水平无明显变化；（7）PI标记显示，壬基酚处理后细胞周期未见明显变化，各期未见明显细胞阻滞；随NP染毒剂量增加，脾脏、胸腺淋巴细胞凋亡率呈上升趋势，NP染毒剂量与细胞凋亡之间存在剂量－效应关系。结论：（1）NP暴露可使大鼠胸腺、脾脏重量明显下降，且存在剂量-效应关系，提示NP能影响大鼠免疫器官的生长发育；（2）NP暴露可严重影响大鼠血液学参数，对血液系统具有一定毒性；（3）病理学检查提示NP对脾脏具有一定的损伤作用，可能影响其功能；（4）NP暴露可使大鼠血清IFN-γ、IL-4含量明显降低，且存在剂量-效应关系。NP亦可影响外周血中NK、NKT细胞水平，提示NP可影响免疫系统功能，具有一定的免疫毒性；（5）NP暴露可影响大鼠胸腺、脾淋巴细胞内ROS、[Ca~(2+)]i、 MMP水平，且存在剂量效应关系。NP暴露亦可一定程度诱导大鼠胸腺、脾脏淋巴细胞发生凋亡。表明壬基酚对脾脏、胸腺淋巴细胞具有一定的毒性作用。这必然对免疫功能包括生殖免疫功能产生影响，对此还需进一步研究。
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【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R131

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