补体激活在三氯乙烯致敏小鼠肝脏损害中作用研究

发布时间：2019-07-20 21:45

【摘要】：研究背景三氯乙烯（TCE）是工业上广泛使用的一种有机溶剂，除了作为高分子化合物的原料以外，60%被五金、玩具、电子等行业用作金属部件和电子元件清洗剂，主要应用在清洗线路板，金属表面脱污去污，也常用作油脂、石蜡的萃取剂，还可用于印染油墨、斑点去污剂、打字改正液等。大量的临床病例显示DMLT患者除了全身性皮肤损害外，还伴有肝损伤，并且DMLT的致死主要原因是肝功能衰竭，因此肝脏损伤的机制研究在DMLT防治工作中显的尤为重要。但有相关研究还发现，TCE所致的药疹样皮炎，特别是免疫性肝脏损伤，不能用迟发型IV型变态反应完全解释。补体激活可能在TCE所致的免疫性肝损伤中也发挥一定的作用，提示在DMLT患者出现的肝功能损伤发生过程中除了IV型变态反应参与外，还可能有补体激活机制参与。研究目的通过检测TCE致敏小鼠不同组别和时点小鼠血清和肝脏中补体活化产物C3a、C5a和C5b-9的表达水平，结合肝功能检查、肝脏脏器系数检查，探讨TCE致敏小鼠补体激活其与肝损伤的关系，最终阐明TCE的危害及其机理并制定防治对策提供理论依据。研究方法选用6~8周健康雌性BALB/c小鼠75只，随机分成空白对照组、溶剂对照组、TCE处理组。建立BALB/c小鼠致敏模型，观察记录小鼠背部受试部位的皮肤致敏反应情况。根据末次激发24h后小鼠的致敏结果以及取材时点的不同(分别于末次激发后24h、48h、72h和7d采血，无菌取皮肤组织和肝脏组织)，将TCE处理组分为致敏24h、48h、72h和7d组和未致敏24h、48h、72h和7d组。采用酶联免疫吸附法检测各组血清中C3a-desArg、C5a-desArg和C5b-9水平。免疫组织化学法检测肝脏组织中C3a、C5a和C5b-9的表达。直接免疫荧光法检测肝脏组织中的C5b-9表达。RT-PCR法检测肝脏组织中C3mRNA表达水平。结果 1.致敏率在皮肤致敏反应试验中，空白对照组、溶剂对照组均未见红斑或水肿，TCE处理组63只小鼠中有23只背部皮肤出现不同程度的红斑和水肿，其余40只为未致敏组，致敏率达36.5%，致小鼠致敏强度为中度 2.肝功能及脏器系数检测结果肝功能检测结果，空白对照组各指标与溶剂对照组相比，差异无统计学意义（P0.05）。与溶剂对照组24h、48h、72h、7d致敏组相比，AST明显增高，差异有统计学意义（P0.05）；与相应的未致敏组相比，24h、48h、72h、7d致敏组AST明显增高，差异有统计学意义（P0.05）。ALT检查结果发现，空白对照组与溶剂对照组相比，差异无统计学意义（P0.05）；72h致敏组与溶剂对照组相比ALT明显增高，差异有统计学意义（P0.05）；与相应的未致敏组相比，差异有统计学意义（P0.05）。7d致敏组与溶剂对照组相比差异无统计学意义（P0.05）。空白对照组与溶剂对照组相比，小鼠肝脏脏器系数无明显变化，差异无统计学意义(P0.05)；然而，24h、48h、72h致敏组脏器系数显著高于溶剂对照组，差异有统计学意义（P0.05）；同时点组间比较，致敏组的脏器系数均高于相应未致敏组，差异有统计学意义（P0.05）；且在末次激发后72h达到最高，24h、48h、72h致敏组之间的差异无统计学意义（P0.05）。 3.血清C3a-desArg、C5a-desArg和C5b-9水平 3.1血清C3a-desArg水平：末次激发后，各组小鼠血清中C3a-desArg的水平，空白对照组与溶剂对照组相比，差异无统计学意义（P0.05）。24h、48h、72h、7d致敏组显著高于溶剂对照组，差异有统计学意义（P0.05）；同时点相比较，致敏组的C3a-desArg水平均高于相对应未致敏组，差异有统计学意义（P0.05）；7d致敏组与溶剂对照组相比无明显差异，差异无统计学意义（P0.05）。且24h、48h、72h致敏组之间相比差异均无统计学意义（P0.05）。3.2血清C5a-desArg水平：末次激发后，各组小鼠血清中C5a-desArg的水平，空白对照组与溶剂对照组相比，差异无统计学意义（P0.05）。24h、48h、72h、7d致敏组显著高于溶剂对照组，差异有统计学意义（P0.05）；同时点相比较，致敏组的C5a-desArg水平均高于未致敏组，差异有统计学意义（P0.05）；24h、48h、72h、7d致敏组之间的差异均无统计学意义（P0.05）。 3.3血清C5b-9水平：末次激发后，各组小鼠血清中C5b-9的水平，空白对照组与溶剂对照组相比，差异无统计学意义（P0.05）。24h、48h、72h、7d致敏组显著高于空白对照组，差异有统计学意义（P0.05）；与溶剂对照组相比，72h致敏组明显升高，，同时点相比较，差异有统计学意义（P0.05）；72h致敏组的C5b-9水平均高于未致敏组，差异有统计学意义（P0.05）；且24h、48h、72h、7d致敏组之间的差异无统计学意义（P0.05）。 4.激发后肝脏组织中C3a、C5a和C5b-9的表达 4.1C3a表达水平：空白对照组与溶剂对照组相比，差异无统计学意义（P0.05）。致敏24h、48h、72h组较溶剂对照组相比评分显著升高，差异有统计学意义（P0.05）；其中致敏72h组表达最高，致敏24h、48h、72h组之间差异无统计学意义（P0.05）；然而致敏7d组C3a表达显著降低，与溶剂对照组比较，差异无统计学意义（P0.05）。 4.2C5a表达水平：空白对照组与溶剂对照组相比，差异无统计学意义（P0.05）。致敏24h、48h、72h、7d组较溶剂对照组显著升高，差异有统计学意义（P0.05）；其中致敏72h组表达最高，致敏24h、48h、72h组之间差异无统计学意义（P0.05）；然而致敏7d组C5a表达显著降低，与致敏72h组比较，差异均有统计学意义（P0.05）。 4.3C5b-9表达水平：空白对照组与溶剂对照组相比，差异无统计学意义（P0.05）。24h、48h、72h、7d致敏组较溶剂对照组显著升高，差异有统计学意义（P0.05）；其中致敏72h组表达最高，致敏24h、48h、72h组之间差异无统计学意义（P0.05）。同时点之间相比较发现，致敏24h、48h、72h组C5b-9表达水平分别高于未致敏24h、48h、72h组，差异有统计学意义（P0.05）。7d致敏组与其未致敏组相比无明显变化，差异无统计学意义（P0.05）。 5.免疫荧光法检测激发后肝脏组织中C5b-9的表达我们对C5b-9在肝脏中的表达进行了更深一步的免疫荧光检测，24h、48h、72h致敏组可以看到明显的表达，并且在72h致敏组表达最高。 6. RT-PCR法检测C3mRNA表达情况应用RT-PCR技术检测各组小鼠肝脏组织中C3mRNA表达情况，灰度值分析显示24h、48h致敏组与空白对照组、溶剂对照组、各自未致敏组相比C3mRNA表达明显增强（P0.05），但是72h致敏组C3mRNA有明显的降低，差异有统计学意义（P0.05），7d致敏组表达无统计学差异（P0.05）。结论 1. TCE在一定剂量下能对小鼠致敏，致敏率为36.5%，TCE对BALB/c小鼠皮肤具有中度致敏作用。 2. TCE暴露可造成小鼠肝功能损伤和脏器系数的改变,72h组之前损伤程度随时间进行而加重。 3. TCE致敏小鼠体内补体系统可能被激活，且补体激活及其产物在TCE接触过敏性皮炎肝脏损伤发生过程中可能发挥重要的免疫调节作用。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R114

【参考文献】