基于核酸适体构象开关的8-羟基脱氧鸟苷检测新方法研究

发布时间：2019-10-03 01:20

【摘要】：8-羟基脱氧鸟苷是氧化应激过程中，羟自由基攻击DNA形成的一种DNA氧化损伤产物，可诱导突变、碱基错配等。研究发现它与机体的衰老、癌症的发生和环境污染物等有一定的相关性，是目前国际公认的DNA氧化损伤生物标志物。建立简便、灵敏、选择性好的8-OHdG定量检测方法，对研究癌症发生、衰老机制等具有重要意义。第二章，建立了一种灵敏度高、特异性强、成本低的比色传感法。本法以未修饰的金纳米粒子为指示探针，未修饰的核酸适体为特异性识别分子，检测人体尿液中8-OHdG。在8-OHdG存在的情况下，Apt构象发生变化，由不规则螺旋结构形成G-四分体结构，致使体系颜色发生改变，，并且与8-OHdG浓度在5.60×10~(-9)~2.82×10~(-7)mol·L~(-1)范围内呈良好的线性关系，检出限为1.68×10~(-9)mol·L~(-1)，相对标准偏差为1.12%~4.19%(n=6)，加标回收率在95.9%~104.9%之间。新建方法无需任何仪器，可对样品直接目测分析。第三章，建立了一种基于金纳米粒子的共振光散射法检测尿中8-OHdG的方法。在高盐溶液中8-OHdG与Apt结合后，金纳米粒子共振光散射强度增加，并且8-OHdG浓度在9.08×10~(-11)~1.41×10~(-8)mol·L~(-1)范围内，与溶液共振光散射强度之间存在良好的线性关系，线性回归方程为ΔIRLS=10.7+12.7c (×10~(-9)mol·L~(-1))，检出限为2.73×10~(-11)mol·L~(-1)，本方法精密度较好，相对标准偏差在1.63%~3.46%(n=6)之间，已用于实际样品检测，结果满意。第四章，建立了一种金纳米粒子分光光度法测定尿8-羟基脱氧鸟苷的方法，在pH为3.5的BR缓冲溶液中，8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)与金纳米粒子作用，导致溶液吸光度比值改变，且在4.98×10~(-7)mol·L~(-1)~1.27×10~(-5)mol·L~(-1)范围内，吸光度值改变与8-OHdG的浓度呈良好的线性关系，其回归方程为：Δ(A_(630)/A_(520))= 0.00713+0.0812c(×10~(-6)mol·L~(-1))，相关系数r=0.9984，检出限为1.50×10~(-7)mol·L~(-1)，相对标准偏差(RSD)在1.48%~3.57%。用于尿中8-OHdG的测定，回收率在96.1%~98.0%。该方法简单、快速、成本低。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R115

【共引文献】