TCDD宫内暴露对F1代雄鼠神经行为发育和空间记忆学习能力的影响
发布时间：2022-01-25 09:40
研究目的:以TCDD为代表的二噁英是典型的环境内分泌干扰物,二噁英可透过胎盘屏障,由胎盘及乳汁进入胚胎及婴儿体内,引发宫内及哺乳期二噁英暴露。世界卫生组织2012年的文章指出,环境内分泌干扰物可对儿童早期发育产生不良影响,不仅包括引起隐睾、尿道下裂、青春期提前,还可影响儿童神经系统发育,对智力、行为和情感造成不良影响。健康与疾病的发育起源理论（Developmental Origins of Health and Disease,DOHaD）指出,宫内敏感时期及出生早期暴露于干扰,会改变器官功能与结构编码（重新编码）,进而引发暴露个体以后生命过程中发生行为学习障碍。本实验希望就宫内暴露于环境内分泌干扰物TCDD对子代神经系统发育及记忆学习能力的影响进行探究,同时对造成这些影响的机制进行一定的探索。研究内容和方法:本研究主要探讨TCDD宫内暴露对F1代雄鼠神经系统发育、神经行为及空间记忆学习能力的影响,主要内容总结如下。1.TCDD宫内暴露实验动物模型的建立:Sprague-Dawley大鼠（SD大鼠）适应性饲养一周后合笼交配,阴栓出现即认为交配成功,并记为孕期第0天（GD0）。将孕鼠随...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Morris水迷宫实验操作流程
16.蒸馏水冲洗海马组织切片 3 次；17.苏木精(Hematoxylin)复染海马神经元细胞核，常温条件下作用 5min；18.蒸馏水冲洗海马组织切片 1 次，冲洗液(Bond Wash Solution)常温冲洗海马组织切片 1 次，再用蒸馏水冲洗 1 次，切片梯度脱水，使用二甲苯透明切片，中性树脂封片。本实验检测使用的显色系统为 BOND Polymer Refine Detection 免疫组化检测系统(Leica, German)。使用 Olympus X81 显微镜(Olympus,Japan)于明场下对海马组织 CA1 区域免疫组化切片进行观察与拍照，以用于进一步量化分析。该显微镜配有计算机辅助高清摄像头，方便观察者使用。采用图像处理软件 Image-ProPlus (Media Cybernetics, USA)对所拍摄照片中的胶质纤维酸性蛋白阳性(GFAP-positive)细胞的累计光密度值(integral optical density, IOD)进行分析。在此将整体实验流程总结为图 4，本实验对宫内暴露于 TCDD 的 F1 代雄鼠神经系统发育的监控从出生早期一直持续到成年期。
对照组 3.24±0.53 24.7±6.2 0.33±0.30 29.8±16.0 —200 ng/kg bw 3.12±0.60 30.6±2.1 0.29±0.17 40.0±6.16 —800 ng/kg bw 3.60±0.19 29.5±3.9 0.31±0.37 37.2±11.1 —注：*与对照组相比，p<0.05，“—”表示未达到检出限。2.4 F1 代雄鼠成年期神经系统免疫组化2.4.1 F1 代雄鼠成年期海马组织 CA1 区神经元尼氏染色结果在 40 倍视野下，可见各组雄鼠海马组织生理结构保持完好，大鼠海马本部CA1 区、CA3 区及齿状回(dentate gyrus, DG)结构均清晰可见。对照组雄鼠 200倍镜可见，海马 CA1 区的锥体细胞层，锥体细胞层的细胞排列整齐，形态完整，胞浆内尼氏小体丰富，染为深蓝色，局部可见蓝染的神经元轴突,胞核圆形，核染色质为淡蓝色，细胞轮廓清楚。200ng/kg bw 剂量组及 800ng/kg bw 剂量组雄鼠于对照组相比并无明显可见差异，神经元结构较为清晰完整(见图 6)。对海马组织 CA1 区神经元进行细胞计数发现，虽然与两个剂量组相比，对照组单位面积上神经元数量稍有上升，但各组间的差异并没有统计学意义(见图 7)。
本文编号：3608312
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Morris水迷宫实验操作流程
16.蒸馏水冲洗海马组织切片 3 次；17.苏木精(Hematoxylin)复染海马神经元细胞核，常温条件下作用 5min；18.蒸馏水冲洗海马组织切片 1 次，冲洗液(Bond Wash Solution)常温冲洗海马组织切片 1 次，再用蒸馏水冲洗 1 次，切片梯度脱水，使用二甲苯透明切片，中性树脂封片。本实验检测使用的显色系统为 BOND Polymer Refine Detection 免疫组化检测系统(Leica, German)。使用 Olympus X81 显微镜(Olympus,Japan)于明场下对海马组织 CA1 区域免疫组化切片进行观察与拍照，以用于进一步量化分析。该显微镜配有计算机辅助高清摄像头，方便观察者使用。采用图像处理软件 Image-ProPlus (Media Cybernetics, USA)对所拍摄照片中的胶质纤维酸性蛋白阳性(GFAP-positive)细胞的累计光密度值(integral optical density, IOD)进行分析。在此将整体实验流程总结为图 4，本实验对宫内暴露于 TCDD 的 F1 代雄鼠神经系统发育的监控从出生早期一直持续到成年期。
对照组 3.24±0.53 24.7±6.2 0.33±0.30 29.8±16.0 —200 ng/kg bw 3.12±0.60 30.6±2.1 0.29±0.17 40.0±6.16 —800 ng/kg bw 3.60±0.19 29.5±3.9 0.31±0.37 37.2±11.1 —注：*与对照组相比，p<0.05，“—”表示未达到检出限。2.4 F1 代雄鼠成年期神经系统免疫组化2.4.1 F1 代雄鼠成年期海马组织 CA1 区神经元尼氏染色结果在 40 倍视野下，可见各组雄鼠海马组织生理结构保持完好，大鼠海马本部CA1 区、CA3 区及齿状回(dentate gyrus, DG)结构均清晰可见。对照组雄鼠 200倍镜可见，海马 CA1 区的锥体细胞层，锥体细胞层的细胞排列整齐，形态完整，胞浆内尼氏小体丰富，染为深蓝色，局部可见蓝染的神经元轴突,胞核圆形，核染色质为淡蓝色，细胞轮廓清楚。200ng/kg bw 剂量组及 800ng/kg bw 剂量组雄鼠于对照组相比并无明显可见差异，神经元结构较为清晰完整(见图 6)。对海马组织 CA1 区神经元进行细胞计数发现，虽然与两个剂量组相比，对照组单位面积上神经元数量稍有上升，但各组间的差异并没有统计学意义(见图 7)。
本文编号：3608312
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