ERK1/2通过调节GSH合成影响淋巴母细胞放射敏感性的初步研究

发布时间：2022-06-03 19:39

　　目的:细胞内的GSH含量对维持细胞内环境的氧化还原状态,以及细胞的正常生理功能起着至关重要的作用,并且氧化还原状态的变化可引起细胞信号转导和基因转录发生改变。本研究通过观察细胞内ERK蛋白表达及其磷酸化改变对GSH合成的影响,以及受X线照射后淋巴母细胞的存活率和DNA损伤情况,来探讨ERK蛋白对淋巴母细胞辐射敏感性的影响及其初步机制。方法:以人类淋巴母细胞TK6细胞为实验对象,选择自由基（Free Radical,FR）和活性氧（reactive oxygen species,ROS）清除剂N-乙酰半胱氨酸（N-Acetyl Cysteine,NAC）、谷胱甘肽（Glutataione,GSH）的合成抑制剂丁硫氨酸亚砜亚胺（L-Buthionine-sulfoximine,BSO）和细胞外信号调节激酶1/2（Extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2）的特异性抑制剂PD98059三种试剂进行实验。首先采用MTT法进行实验药物的浓度选择,随后以对数期生长的TK6细胞通过分组,经过各种试剂预处理后,采用GSH试剂盒检测细胞内GSH和GS... 

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩略词表及中英文对照
中文摘要
英文摘要
1 前言
2 材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 药物及试剂
        2.1.3 仪器与设备
        2.1.4 常用试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养与保株
        2.2.2 MTT实验
        2.2.3 Western Blot检测
        2.2.4 GSH/GSSG含量测定(标准曲线法)
        2.2.5 细胞活性实验
        2.2.6 微核(micronucleus)分析
        2.2.7 照射条件
        2.2.8 统计学分析
3 实验结果
    3.1 药物的无毒浓度选择
        3.1.1 BSO的无毒实验浓度选择
        3.1.2 PD98059的无毒实验浓度选择
    3.2 不同处理后TK6细胞内ERK1/2 蛋白的表达变化
    3.3 不同处理后TK6细胞内T-GSH、GSH以及GSSG含量的变化
        3.3.1 TK6细胞T-GSH和GSSG检测的标准曲线
        3.3.2 不同处理后，TK6细胞内T-GSH、GSH和GSSG的含量变化
    3.4 不同预处理后，受照射TK-6 细胞活性的变化
    3.5 不同预处理后，受照射TK6细胞的微核形成情况
4 讨论
5 结论
参考文献
附录
致谢
综述 MAPK/ERK信号通路与细胞抗凋亡机制的研究进展
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]Protective Effects of Shikonin on Brain Injury Induced by Carbon Ion Beam Irradiation in Mice[J]. GAN Lu,WANG Zhen Hua,ZHANG Hong,ZHOU Rong,SUN Chao,LIU Yang,SI Jing,LIU Yuan Yuan,WANG Zhen Guo.  Biomedical and Environmental Sciences. 2015(02)
[2]两种人类淋巴母细胞TK、HPRT基因突变实验比较研究[J]. 张勇,张立实.  癌变.畸变.突变. 2007(01)
[3]TK6和WTK1细胞对H2O2诱导的DNA损伤和修复能力的比较[J]. 张建清,张立实,王瑞淑.  四川大学学报(医学版). 2004(06)
[4]以外周血淋巴细胞数做为评价急性放射病严重程度的标准[J]. СувороваЛАпдр,宋永良.  国外医学(放射医学核医学分册). 1992(04)



本文编号：3653361