精制清开灵对慢性脑缺血大鼠海马区神经营养因子的影响
发布时间：2020-03-18 18:36
【摘要】：目的本研究通过运用永久性结扎双侧颈总动脉法建立慢性脑缺血损伤的大鼠模型,观察精制清开灵对模型大鼠空间学习记忆能力及对海马神经元形态的影响,从行为学和组织形态学做出初步药效评价。在此基础上重点研究精制清开灵对模型大鼠海马CA1区脑源性神经营养因子BDNF及受体TrkB、神经生长因子NGF、神经营养因子NT-3表达的影响,以期部分阐明精制清开灵抗慢性脑缺血损伤的作用机制。方法(1)采用对实验大鼠永久性结扎双侧颈总动脉的方法制作慢性脑缺血大鼠模型。实验动物分为正常组(Sham)、模型组(Model)、多奈哌齐组(Donepezi)、精制清开灵组(RQKL)。大鼠造模后给予药物连续灌胃60天。通过Morris水迷宫行为学实验,对各组进行定位航行和空间探索测试,实验共进行5天。水迷宫测试结束后,随机抽取各组的部分实验大鼠进行灌注固定取材,制成脑组织海马石蜡切片,进行HE染色,光镜下观察海马神经元的形态变化。(2)采用免疫组化方法、免疫印迹分析方法测定海马CA1 区脑源性神经营养因子BDNF及其受体TrkB的蛋白表达变化,用Real Time PCR方法测定BDNFmRNA、TrkBmRNA的表达变化,分析精制清开灵对BDNF、TrkB的表达影响。(3)运用免疫组化方法、酶联免疫吸附实验法测定海马CA1区神经营养因子NT-3、神经生长因子NGF蛋白表达,用Real Time PCR方法测定NGFmRNA、NT-3 mRNA的表达变化,分析精制清开灵对NT-3、NGF的表达影响。结果(1)慢性脑缺血模型大鼠在进行永久双侧颈总动脉结扎后出现一些行为学和组织形态学的病态改变。在水迷宫测试中,慢性脑缺血模型大鼠表现出明显的学习记忆障碍。与Sham组大鼠相比,Model组大鼠逃避潜伏期的降低趋势比较平缓,逃避潜伏期时间明显延长(P0.05);Model组大鼠穿越平台次数及穿越原平台象限次数均显著减少(P0.01),具有统计学意义;经HE染色可见Model组海马CA1区神经元数量较Sham组明显减少,锥体细胞排列松散紊乱,胞体缩小,细胞核固缩或溶解,细胞间距变大,少部分神经细胞出现水肿,呈现出一些较明显的缺血性病理改变。(2)精制清开灵药物连续灌胃60天后,经水迷宫定位航行实验结果显示,与Model组大鼠相比,RQKL组大鼠逃避潜伏期下降趋势较明显,逃避潜伏时间明显缩短(P0.05);空间探索实验结果显示,与Model组大鼠相比,RQKL组大鼠穿越平台次数及穿越原平台象限次数均明显上升(P0.05),具有统计学意义。经HE染色可见RQKL组大鼠神经元数量较Model组增多,神经细胞丢失减少,细胞排列较为有序,细胞边界较清晰,固缩现象减少,细胞数和形态接近Sham组。(3)精制清开灵干预下海马CA1区脑源性神经营养因子BDNF及其受体TrkB的蛋白水平及BDNFmRNA、TrkBmRNA的表达均有明显变化。采用免疫组化方法测定显示,与Model组相比,RQKL组BDNF、TrkB在海马CA1区椎体细胞棕黄色阳性表达均明显增多(分别为0.48±0.06,P0.05;0.39±0.05,P0.05)。采用免疫印迹分析法测定结果显示,与Model组相比,RQKL组BDNF、TrkB蛋白含量均明显提高(分别为0.49±0.07,P0.05;0.41±0.09,P0.01)。运用RT-PCR法检测结果显示,与Model组相比,RQKL组BDNFmRNA、TrkBmRNA表达水平明显升高(分别为0.79±0.10,P0.05;0.71±0.04,P0.05)。(4)精制清开灵干预下海马CA1区神经营养因子NT-3、神经生长因子NGF蛋白含量及NT-3mRNA、NGFmRNA的表达均有明显改变。免疫组化实验结果显示,与Model组相比,RQKL组神经营养因子NT-3、神经生长因子NGF在海马CA1区的阳性细胞表达均有上升(分别为0.58±0.04,P0.01;0.33±0.04,P0.05)。采用酶联免疫吸附方法检测结果显示,与Model组相比,RQKL组海马中NT-3、NGF蛋白含量明显增多(分别为157.24±16.58,P0.01;122.05±14.34,P0.05)。运用Real Time PCR法检测结果显示,与Model组相比,RQKL组NT-3mRNA、NGFmRNA表达水平明显升高(分别为1.35±0.11,P0.01;0.84±0.08 P0.05)。结论(1)精制清开灵可在一定程度上改善慢性脑缺血大鼠空间学习记忆的能力,减轻慢性脑缺血引起的大鼠海马神经元的损伤。(2)精制清开灵可上调海马CA1区脑源性神经营养因子BDNF及其受体TrkB的蛋白水平及mRNA的表达,说明其促进BDNF及其受体TrkB的有效结合,从而发挥对神经元的保护作用,有可能是精制清开灵抗慢性脑缺血损伤的作用途径之一。(3)精制清开灵可上调海马CA1区神经营养因子NT-3、神经生长因子NGF蛋白水平及mRNA的表达,在一定程度上发挥对神经元的保护作用,有可能是精制清开灵抗慢性脑缺血损伤的作用途径之一。
【图文】：
图１－１定位航行实验各组大鼠逃避潜伏期趋势图（秒）（Ｘ土ｓ，邋ｎ＝１５）逡逑
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本文编号：2589032
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