中药复方对DN小鼠肾组织TGF-β1、PTEN蛋白表达的影响及临床疗效观察

发布时间：2020-03-18 19:34

【摘要】：目的:本研究在文献研究梳理糖尿病肾病的流行病学、致病风险因素、病理学特征及病理转归、治疗方法等基础上,采用临床与基础实验研究相结合的方式对中药复方治疗糖尿病肾病的疗效及机制进行深入研究。基础实验研究观察加味建瓴汤及加味金匮肾气丸对链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的小鼠糖尿病肾病模型的血糖、尿蛋白、肾脏肥大指数、炎性因子、肾脏组织病理学、尿激素型纤溶酶原激活物、转化生长因子-β1和PI_3K-PKB/Akt通路的负调节酶PTEN的影响,探讨中药复方防治糖尿病肾病的疗效和作用机制;临床研究观察评价加味金匮肾气丸治疗糖尿病肾病的临床疗效及安全性。材料与方法:1.STZ糖尿病肾病小鼠模型实验:C57BL雄性小鼠45只,自5周龄开始饲养高能饲料3周,当老鼠年龄达8周龄开始实验,随机抽取9只为正常对照组,不做任何处置,余下36只采用STZ诱导进行糖尿病肾病小鼠造模,造模成功后随机分成四组,每组9只,DC组作为模型组,仅造模不给处置;CM1组为中药治疗1组,给予加味建瓴汤治疗;CM2组为中药治疗2组,给予加味金匮肾气丸治疗;ACEI组为西药对照组,给予captopril治疗。在造模前0周、造模后第2周及第4周,分别测量小鼠的体重、血糖。造模后的第4周加测尿总蛋白、尿肌酐等生化数值。造模后第4周对小鼠进行二氧化碳昏迷方式处死,摘取肾脏测量肾重,计算肾脏肥大指数;肾脏组织切片做免疫组织化学染色,染色对象包括和细胞外基质增生相关的细胞因子TGF-β1、炎症因子IL-6、与血栓溶解系统相关的尿激素型纤溶酶原激活物(uPA)、以及负性调控Akt/PKB信号通道的PTEN等蛋白的表达,通过比较模型组与空白对照组以及两组中药与西药阳性对照组,观察肾组织病理的变化及上述指标在肾组织中的蛋白表达。2.临床试验:收集从2014年9月-2016年9月,来台湾育生中医诊所及合作医院之肾脏科门诊或住院的糖尿病肾病患者,纳入中医辨证为脾肾阳虚、痰湿内阻的糖尿病患者,且糖尿病肾病在Mogensen诊断标准为第三期或第四期。进入实验的患者在原本治疗方案的基础上,需服用加味金匮肾气丸12周的疗程,观察并记录患者治疗前后的症状、血糖、糖化血红蛋白、血肌酐、尿肌酐、尿微量白蛋白、肝功能(包括AST,ALT)等数据的变化。结果:1.STZ糖尿病肾病小鼠模型实验:和未经治疗的糖尿病小鼠相比,使用中药加味金匮肾气丸治疗,对于小鼠血糖值的影响不显著,但可以明显减少尿总蛋白排泄量以及尿总蛋白/肌酐比值(urinaryprotein/creatinine ratio,UPCR),亦可以改善小鼠的肾脏肥大指数。此结果和使用ACEI治疗的西药对照组结果是类似的。使用加味建瓴汤治疗的的小鼠,可以降低小鼠的血糖值、减少尿总蛋白排泄量以及改善肾脏肥大指数,但在尿总蛋白/肌酐比值则没有显著差异。肾脏重量和肾脏肥大指数上,中药两组间及与ACEI组间无明显差异。相较于DC组,CM1组、CM2组及ACEI组肾组织TGF-β1蛋白表达下降,uPA蛋白表达增强,但在肾组织IL-6蛋白表达及PTEN蛋白表达,各组之间则没有显著差异。2.临床试验:本研究共纳入患者38例,其中11例为男性,27例为女性。所有患者使用加味金匮肾气丸治疗12周,血糖治疗前水平(164.92±46.61)mg/dL,治疗后水平(155.08±42.69)mg/dL,差异具有统计学意义;治疗前血肌酐水平(1.34±0.56)mg/dL,治疗后水平(1.28±0.59)mg/dL,差异具有统计学意义;治疗前尿白蛋白水平(15.01±12.87)mg/dL,治疗后水平(13.25±12.65)mg/dL,差异具有统计学意义;中医证候评分治疗前分数(30.79±8.71),治疗后分数(20.05±6.55),差异具有统计学意义;生活质量治疗前分数(70.82±17.74),治疗后分数(61.79±13.08),差异具有统计学意义。中医证候疗效判定的总有效率68.42%,肌酐清除率和肾小球滤过率的总有效率为55.26%。结论:1.STZ糖尿病肾病小鼠模型实验:加味建瓴汤可以降低STZ诱导的糖尿病肾病小鼠的血糖值和肾脏肥大指数,减少尿总蛋白排泄量,减轻肾脏病理损害。加味金匮肾气丸可以明显减少STZ诱导的糖尿病肾病小鼠尿总蛋白排泄量以及UPCR,同时可以改善小鼠的肾脏肥大指数,减轻肾脏病理损害,其保护肾脏的机制和血糖改善无关。加味建瓴汤、加味金匮肾气丸和西药captopril三组药物,都可以显著改善STZ诱导的糖尿病肾病小鼠之尿总蛋白排泄量和肾脏肥大指数,减轻肾脏病理损害,其机制与降低肾组织TGF-β1表达、增强uPA蛋白表达相关,与肾组织IL-6及PTEN蛋白表达无关。2.临床试验:以温补脾肾、去湿化痰为主的加味金匮肾气丸,能改善脾肾阳虚兼痰湿内阻型糖尿病肾病患者的临床症状,降低空腹血糖值,改善肾功能和生活质量,治疗期间没有发现严重不良反应,肝功能亦维持正常,说明加味金匮肾气丸治疗糖尿病肾病是一种安全可靠的药物。
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图 1-1 体重逐周记录(g)表 1-2 各组体重变化量结果(g)组别 n 第 2 周-0 周 第 4 周-0 周NC 组 9 2.06±1.38 4.31±2.14DC 组 8 1.44±1.13 2.15±1.17*CM1 组 9 0.94±1.71 2.49±1.62CM2 组 8 1.11±1.13 2.83±1.65ACEI 组 8 1.04±1.01 2.03±0.73*5 组变异数分析(P 值)0.388 0.029：与 NC 组组间比较，，*P<0.05

图 1-2 体重变化(g)2 各组血糖的变化糖尿病临床上以高血糖为特征，各组小鼠空腹血糖值记录图表如下表 2-1、图2-1所示，在造模后的第 2 周和第 4

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