芒果苷抗酒精性肝损伤作用机制的实验研究

发布时间：2020-03-20 23:00

【摘要】：芒果叶为芒果(Mangifera indica L.;原始花被亚纲,无患子目,漆树科)的干燥叶子,其获得途径容易,为我国传统中药,在临床上可治疗热结腹痛、腹胀等疾病,煎药外洗可治疗烂疮。我们对广西省、云南省不同品种的芒果叶药材进行了生药鉴定(基原、原植物形态、性状、粉末、横切面等),为该药材的区分和进一步的开发研究提供了科学依据。芒果苷(Mangiferin,MFN)为芒果叶的主要有效成分,因其无毒无副作用在临床上广泛应用。近代研究表明MFN有抗炎、抗脂质代谢异常、抗糖尿病、抗癌、杀菌及促雌激素样作用。结合酒精性肝损伤(Alcoholic liver disease,ALD)发病原因和MFN的药理活性,推测MFN可能对ALD具有治疗作用,这在我们的前期实验中也得到了证实。采用40%酒精诱导的大鼠ALD模型,与人长期过度酗酒导致的ALD具有相似性,是研究ALD疾病的理想模型。本文探讨了不同品种的芒果叶的鉴定及MFN的提取与纯化,并通过肝功、相关生化指标的检测,病理组织学检查和实时荧光定量PCR技术的应用,从多方面评价MFN是否具有抗ALD的功效与作用,初步探讨其相关机制。主要研究内容如下:1.芒果叶的鉴定及芒果苷的提取与纯化不同品种芒果叶片在颜色、导管、非腺毛、石细胞、草酸钙结晶和叶中脉横切面上有较大区别,有时散落分布在主脉两侧,有时连续呈半环状;厚壁组织、分泌细胞、髓、髓射线、油室有多有少;初生木质部和次生木质部导管直径的相对大小有时相差不大,有时明显可以区分。以上实验结论可作为不同品种的芒果叶的性状和粉末、横切面的鉴定依据。通过不同品种芒果叶中MFN的含量检测,我们发现百色芒果叶中MFN的含量最多。因此本实验以百色芒果叶为材料,依次通过乙醇提取、石油醚萃取脱色、低压加热浓缩、过滤、重结晶、浓缩、过滤等一系列处理后得到MFN粗品;然后使用聚酰胺柱色谱以水-乙醇系统梯度洗脱分离得到纯品MFN,产率为77.6%;最后利用高效液相色谱法与MFN标准品对比,测定提纯得到的MFN的纯度为98%,完全符合后续MFN药理学实验要求,且为工业化提取分离MFN提供了一定的借鉴。2.MFN对ALD大鼠的保护作用将实验大鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟宾组(SYN,20 mg/kg)和MFN高、低剂量组(100、50 mg/kg),采取40%酒精(10 mL/kg)灌胃的方式建立ALD大鼠模型,同时进行药物治疗。4周后,检测血清中ALT、AST、TBIL、DBIL和IBIL的浓度,肝组织中TNF-α和IL-6的水平以及NF-κB mRNA的表达,并观察肝组织HE和油红O染色情况。结果所示,相比于正常组,模型组大鼠肝、脾、肾相对重量明显升高(P0.01),模型组大鼠血清中ALT、AST、TBIL、DBIL和IBIL的浓度明显升高(P0.01),肝组织中TNF-α和IL-6水平以及NF-κB mRNA表达程度亦明显升高(P0.01),同时肝脏出现大量空泡病变、肝细胞肿胀、脂肪聚集、炎症细胞浸润等现象。MFN高、低剂量组对上述指标异常均有显著的改善作用(P0.01,P0.05),肝细胞病变程度明显减轻,并且具有剂量依赖性。综上所述,不同品种芒果叶在生药鉴定中有较大区别,其生药鉴定为该药材的区分和进一步的开发研究提供科学依据;本实验中MFN的提取与纯化方法,可为后面的MFN药理学实验研究提供基础;MFN具有良好的抗ALD的作用,其作用机制可能与促进肝细胞修复,调节肝细胞炎症因子TNF-α、IL-6水平和NF-κB的mRNA表达有关。
【图文】：

芒果树,芒果叶片,芒果叶

其原产地为印度、马来西亚、缅甸，现热带各地均有栽培，其叶廉价易得。我国芒果栽培历史悠久，最早追溯到唐代，主要从印度引种[1]。我国的两广地区、南部沿海地区、四川攀枝花地区以及台湾为芒果的主要产区。根据中国农业部统计的种植面积和产量信息来看，中国已是世界第七大芒果生产国[2]。芒果叶一般表现为椭圆形或椭圆状披针形，长约 10~30 cm，宽约 3~6 cm；叶较薄，，质地韧且厚，多集中生长于枝顶；叶基部多近似圆形或楔形，尖端渐窄或呈现急尖状，边缘多呈波浪型；叶面光泽无毛，两面突起，不显网脉；叶柄的基部膨大，多具槽[3]，见图 1-1。据《全国中草药汇编》记载，芒果叶中含芒果苷、槲皮素、没食子酸、鞣质、鞣花酸、抗坏血酸、奎尼酸以及莽草精、山奈醇等多种化学物质[4]。其中 MFN 在芒果叶中的含量能够达到 10.8%左右，是芒果叶中含量较高的化学成分和有效的生物活性成分。随着对芒果叶进行不断深入的研究，芒果叶中大量未被发现的化学成分也逐渐得到了分离与鉴定。

芒果苷,化学结构

第 1 章前言果苷的结构及理化性质（mangiferin, MFN），别名莞知母宁、芒果素，是一种具有四羟基吡，属于双苯吡酮类的黄酮化合物，主要从扁桃树的叶、果实、树皮，龙骨科和光石韦龙胆科等植物中分离得到，也是中药知母的主要活性灰黄色针状结晶；熔点 267~272 ℃；略溶于水和有机溶剂（如甲醇、乙非极性溶剂。芒果苷分子式为 C19H18O11，分子量为 422.33。芒果苷的 1-2。
【学位授予单位】：河北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】