丹参通络解毒汤联合内皮祖细胞移植对心肌缺血再灌注损伤大鼠促血管新生机制研究

发布时间：2020-03-21 00:05

【摘要】：目的探讨丹参通络解毒汤联合内皮祖细胞(EPCs)移植对心肌缺血再灌注损伤(IRI)模型大鼠的促血管新生作用及其机制。方法采用密度梯度离心法及差数贴壁法分离和培养EPCs,采用免疫荧光法鉴定EPCs。通过结扎左冠状动脉左前降支的方法建立IRI模型,采用随机数字表法分为SH组(假手术组)、IRI组(模型组)、EPCs组(EPCs移植组)、DSTLJD组(丹参通络解毒汤组)、DSTLJD+EPCs组(丹参通络解毒汤+ EPCs移植组)、PI3K抑制剂组(丹参通络解毒汤+EPCs 移植+PI3K 抑制剂 LY294002),每组 10只。EPCs 组、DSTLJD+EPCs组、PI3K抑制剂组大鼠术后于尾静脉处注入EPCs悬液,DSTLJD组、DSTLJD+EPCs组、PI3K抑制剂组于术后1天予丹参通络解毒汤灌胃,每天2次,其余组予生理盐水灌胃,PI3K抑制剂组在术后经尾静脉注射LY294002(PI3K的特异性抑制剂LY294002,0.3 mg/kg)。4周后,采用HE染色法观察心肌组织的病理形态;用免疫组化法测定各组大鼠心肌组织CD34的表达,比较和计算心肌微血管计数(MVC)、心肌微血管密度(MVD),并检测各组大鼠血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)的蛋白表达;采用Western blot检测各组大鼠PI3K、p-AKT、AKT的蛋白表达。结果与IRI组比较,EPCs组、DSTLJD组、DSTLJD+EPCs组大鼠心肌组织损伤程度较前改善,MVC、MVD显著增多,VEGF、bFGF蛋白表达均显著增高,PI3K、p-AKT表达升高,差异具有统计学意义(P0.01),其中DSTLJD组优于EPCs组,差异具有统计学意义(P0.05);与EPCs组、DSTLJD组相比,DSTLJD+ EPCs组心肌损伤程度较前明显改善,MVC、MVD明显增多,VEGF、bFGF蛋白表达明显增高,PI3K、p-AKT表达升高,差异具有统计学意义(P0.01);与DSTLJD+EPCs组比较,在丹参通络解毒汤联合EPCs移植的基础上,应用PI3K抑制剂LY294002之后,PI3K抑制剂组大鼠心肌组织损伤程度较重,MVC、MVD明显降低,VEGF、bFGF蛋白表达明显下降,PI3K的表达量差异无统计学意义(P0.05),p-AKT的表达显著下降,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:1.丹参通络解毒汤可明显减少炎性细胞的浸润,改善心肌组织病理形态。2.丹参通络解毒汤可明显使MVC、MVD增多,上调VEGF、bFGF的表达,升高PI3K、p-AKT的表达,促进心肌IRI大鼠的血管新生,其机制可能与调节PI3K/AKT信号通路有关。3.丹参通络解毒汤联合EPCs移植可明显改善心肌组织病理形态,使MVC、MVD显著增多,明显上调VEGF、bFGF的表达,显著升高PI3K、p-AKT的表达,促进血管新生,从而保护IRI大鼠心肌,且作用优于单纯丹参通络解毒汤与单纯EPCs移植,且其机制可能与调节PI3K/AKT信号通路有关。
【图文】：

单核细胞

第1d分离的单核细胞（10*）

7d后EPCs呈梭形改变（10*）
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】