苦丁茶冬青皂苷的生物转化及药理活性研究

发布时间：2020-03-25 18:03

【摘要】：苦丁茶冬青Ilex kudincha C.J.Tseng是冬青科冬青属乔木植物,其叶作茶是苦丁茶主流商品之一。苦丁茶冬青化学成分丰富,其中三萜皂苷类化合物是其主要的活性成分,如何提高苦丁茶冬青皂苷的含量是近年研究的热点。本文利用生物转化的方法,筛选高效菌株,通过对生物转化的初始pH值、发酵温度、发酵时间、摇床转速等条件的研究,获得最佳发酵工艺条件,并对转化产物的抗氧化、抗肿瘤作用进行研究,为苦丁茶冬青皂苷的进一步开发应用提供实验数据。本文选取四种微生物菌株分别为大肠埃希氏菌、凝结芽孢杆菌、黑根霉、黑曲霉发酵苦丁茶冬青总皂苷,HPLC系统分析比较转化前后化合物的含量变化。结果表明,大肠埃希氏菌、凝结芽孢杆菌发酵后各个单体皂苷含量变化不明显,黑根霉发酵后各个单体皂苷含量显著降低,黑曲霉发酵后苦丁皂苷C、苦丁皂苷E含量显著降低,苦丁皂苷A、苦丁皂苷D含量显著提高。本文以苦丁皂苷A、苦丁皂苷D的含量为指标,在单因素实验的基础上,采用正交实验设计优化黑曲霉转化苦丁茶冬青总皂苷生成苦丁皂苷A、苦丁皂苷D的条件,最佳工艺条件为:初始pH值6.0,发酵温度25℃,发酵时间7d,摇床转速120r/min。通过硅胶柱色谱、ODS柱色谱对转化产物进行分离纯化,并利用HPLC、NMR鉴定检识,确定转化产物结构,外标法显示纯度均≥95%。本文对转化产物的抗氧化作用进行了系统的研究,包括还原能力、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、抑制脂质过氧化能力的测定。结果表明,苦丁皂苷A的抑制脂质过氧化能力显著(P0.05),苦丁皂苷D的DPPH自由基清除能力显著(P0.05),苦丁皂苷C的羟自由基和超氧阴离子自由基清除能力显著(P0.05),苦丁皂苷E的抗氧化活性与苦丁皂苷C的抗氧化活性规律是一致的。本文对转化产物的抗肿瘤作用也进行了系统的研究,包括人肺癌细胞NCI-H460、人肝癌细胞Bel-7402、人胃腺癌细胞SGC-7901、人结直肠腺癌细胞HCT116、人神经胶质细胞瘤细胞U251的抑制作用。结果表明,苦丁皂苷A的人肺癌细胞NCI-H460抑制作用显著(P0.05),苦丁皂苷D的人肝癌细胞Bel-7402、人胃腺癌细胞SGC-7901抑制作用显著(P0.05),苦丁皂苷C的人结直肠腺癌细胞HCT116、人神经胶质细胞瘤细胞U251抑制作用显著(P0.05),苦丁皂苷E的肿瘤抑制作用不显著(P0.05)。
【图文】：

图 1-1 苦丁茶冬青中常见三萜母核及糖基Figure 1-1 Common triterpenoid saponins nucleus and sugar bases in Ilex kudingcha表 1-1 苦丁茶冬青中三萜皂苷类化合物结构Table 1-1 The structure of triterpenoid saponins in Ilex kudingcha称 母核 R1R2R3参考文side G A S3Me Glc [13side H A Ara Me Glc [13side L A S4Me Glc [19side M A S4Me S1 [19side P A S5CH2OH Glc [19inoside B A Glc Me Glc [14inoside D A Ara CH2OH Glc [14inoside E A S2Me Glc [14inoside W A S6Me S1[21oside A A SMe S[22

151. 苦丁皂苷 C;2. 苦丁皂苷 A;3. 苦丁皂苷 E;4. 苦丁皂苷 D图 1-2 苦丁茶冬青皂苷转化前后 HPLC 图Figure 1-2 HPLC diagram before and after saponin transformation in Ilex kudingcha
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284;R285

【参考文献】

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本文编号：2600231