满药赤雹根总皂苷对CIA大鼠滑膜和脾脏中IL-12、IL-21及IL-23表达的影响

发布时间：2020-03-28 04:04

【摘要】：类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以慢性炎症为主要表现的自身免疫性疾病。常累积对称的肢体小关节,以侵蚀性滑膜炎为主要病变,可导致软骨和骨质的破坏,使关节功能受限、最终发生关节畸形,严重影响RA患者的生活质量。在RA疾病的治疗中,抑制炎性细胞浸润滑膜组织和调节体内细胞亚群的失衡有关。赤雹(Thladiantha dubia Bunge)属葫芦科多年蔓生草本植物,药用部位主要为块根,为满族民间常用药材。其多用于治疗跌打损伤、腰腿痛、风湿痛等,无明显的毒副作用,治疗效果显著。本研究通过采用与RA患者病理机制相似的胶原诱导性关节炎(Collagen Induced Arthritis,CIA)大鼠模型,探讨赤雹根总皂苷(Total saponins of Thladiantha Dubia Root,TSTR)对CIA大鼠滑膜和脾脏中IL-12、IL-21及IL-23表达的影响,以了解TSTR治疗RA的相关机理。目的:观察TSTR对CIA大鼠滑膜和脾脏中IL-12、IL-21与IL-23表达的影响,探讨TSTR治疗RA的作用机理,为TSTR在临床治疗RA提供治疗方向和科学依据。方法:1分组、造模及给药80只SPF级8周龄雄性Wistar大鼠,适应性饲养1周后,随机取10只作为正常对照(Normal control,NC)组,其余大鼠均腹腔注射(Intraperitoneal injection,ip)5%水合氯醛(1 ml/100 g)麻醉,剪去背部及尾根部的鼠毛,多点注射牛Ⅱ型胶原蛋白与FCA的混合制剂,以注射点周围显现白泡为佳,1周后再加强注射1次复制CIA模型。从初次免疫后第14天开始,计算大鼠关节炎指数(AI)值,若AI≥4则判定造模成功。将模型大鼠分层随机分为模型对照(Model control,MC)组、雷公藤多苷(Tripterygium Glycoside,TG,12 mg·kg~(-1))组和TSTR低、中、高剂量组(20、40、80 mg·kg~(-1)),每组10只。给药组大鼠每天灌胃(ig)给药1次,NC组和MC组大鼠ig等体积蒸馏水,连续给药35 d。2检测指标2.1计算AI值;2.2 HE观察滑膜病理学变化;2.3免疫组化检测滑膜中IL-12、IL-21和IL-23蛋白的表达;2.4 RT-qPCR检测滑膜中IL-12、IL-21和IL-23mRNA的表达;2.5免疫组化检测脾脏中IL-12、IL-21和IL-23蛋白的表达;2.6 RT-qPCR检测脾脏中IL-12、IL-21和IL-23mRNA的表达结果:1 TSTR对大鼠AI值的影响以AI值≥4判定RA大鼠建模成功。治疗前,与NC组比,所有模型大鼠AI值均显著升高(P0.01);治疗后,与MC组比,TSTR 20 mg·kg~(-1)组、TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组大鼠AI值均显著降低(P0.01),TG组大鼠AI值显著降低(P0.01)。2 TSTR对CIA大鼠滑膜中病理变化的影响与NC组比较,MC组滑膜细胞布局紊乱,内部可见新生血管及大量炎症细胞浸润。经给药治疗后,与MC组比较,TSTR 20 mg·kg~(-1)组和TG组未见新生血管和炎性细胞浸润,TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组可见少量新生血管和炎性细胞浸润。3 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-12、IL-21及IL-23蛋白表达的影响3.1 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-12蛋白表达的影响与NC组比,MC组大鼠滑膜中IL-12蛋白表达显著升高(P0.01);与MC组比,TSTR 20 mg·kg~(-1)组、TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组大鼠滑膜中IL-12蛋白表达均显著降低(P0.01),TG组大鼠滑膜中IL-12蛋白表达显著降低(P0.01)。3.2 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-21蛋白表达的影响与NC组比,MC组大鼠滑膜中IL-21蛋白表达显著升高(P0.01),与MC组比,TSTR 20 mg·kg~(-1)组、TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组大鼠滑膜中IL-21蛋白表达均显著降低(P0.01),TG组大鼠滑膜中IL-21蛋白表达显著降低(P0.01)。3.3 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-23蛋白表达的影响与NC组比,MC组大鼠滑膜中IL-23蛋白表达显著升高(P0.01),与MC组比,TSTR 20 mg·kg~(-1)组、TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组大鼠滑膜中IL-23蛋白表达均显著降低(P0.01),TG组大鼠滑膜中IL-23蛋白表达显著降低(P0.01)。4 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-12、IL-21及IL-23mRNA表达的影响4.1 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-12mRNA表达的影响与NC组比,MC组大鼠滑膜中IL-12mRNA表达显著升高(P0.01),与MC组比,TSTR 20 mg·kg~(-1)组、TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组大鼠滑膜中IL-12mRNA表达均显著降低(P0.01),TG组大鼠滑膜中IL-12mRNA表达显著降低(P0.01)。4.2 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-21mRNA表达的影响与NC组比,MC组大鼠滑膜中IL-21mRNA表达显著升高(P0.01),与MC组比,TSTR 20 mg·kg~(-1)组、TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组大鼠滑膜中IL-21mRNA表达均显著降低(P0.01),TG组大鼠滑膜中IL-21mRNA表达显著降低(P0.01)。4.3 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-23mRNA表达的影响与NC组比,MC组大鼠滑膜中IL-23mRNA表达显著升高(P0.01),与MC组比,TSTR 20 mg·kg~(-1)组、TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组大鼠滑膜中IL-23mRNA表达显著降低(P0.01),TG组大鼠滑膜中IL-23mRNA表达显著降低(P0.01)。5 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-12、IL-21及IL-23蛋白表达的影响5.1 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-12蛋白表达的影响与NC组比,MC组大鼠脾脏中IL-12蛋白表达显著升高(P0.01),与MC组比,TSTR 20 mg·kg~(-1)组、TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组大鼠脾脏中IL-12蛋白表达均显著降低(P0.01),TG组大鼠脾脏中IL-12蛋白表达显著降低(P0.01)。5.2 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-21蛋白表达的影响与NC组比,MC组大鼠脾脏中IL-21蛋白表达显著升高(P0.01),与MC组比,TSTR 20 mg·kg~(-1)组、TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组大鼠脾脏中IL-21蛋白表达均显著降低(P0.01),TG组大鼠脾脏中IL-21蛋白表达显著降低(P0.01)。5.3 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-23蛋白表达的影响与NC组比,MC组大鼠脾脏中IL-23蛋白表达显著升高(P0.01),与MC组比,TSTR 20 mg·kg~(-1)组、TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组大鼠脾脏中IL-23蛋白表达均显著降低(P0.01),TG组大鼠脾脏中IL-23蛋白表达显著降低(P0.01)。6 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-12、IL-21和IL-23mRNA表达的影响6.1 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-12mRNA表达的影响与NC组比,MC组大鼠脾脏中IL-12mRNA表达显著升高(P0.01),与MC组比,TSTR 20 mg·kg~(-1)组、TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组大鼠脾脏中IL-12mRNA表达均显著降低(P0.01),TG组大鼠脾脏中IL-12mRNA表达显著降低(P0.01)。6.2 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-21mRNA表达的影响与NC组比,MC组大鼠脾脏中IL-21mRNA表达显著升高(P0.01),与MC组比,TSTR 20 mg·kg~(-1)组、TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组大鼠脾脏中IL-21mRNA表达均显著降低(P0.01),TG组大鼠脾脏中IL-21mRNA表达显著降低(P0.01)。6.3 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-23mRNA表达的影响与NC组比,MC组大鼠脾脏中IL-23mRNA表达显著升高(P0.01),与MC组比,TSTR 20 mg·kg~(-1)组、TSTR 40 mg·kg~(-1)组和TSTR 80 mg·kg~(-1)组大鼠脾脏中IL-23mRNA表达均显著降低(P0.01或P0.05),TG组大鼠脾脏中IL-23mRNA表达显著降低(P0.01)。结论:1 TSTR能显著降低AI值,说明TSTR对大鼠CIA有明显的治疗作用;2 TSTR对大鼠CIA的显著治疗作用,与下调滑膜和脾脏中IL-12、IL-21及IL-23蛋白和mRNA的表达有关。
【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2603897