芸香柚皮苷对OVA诱导过敏性哮喘免疫失衡的干预作用研究
发布时间：2020-04-01 20:00
【摘要】：陈皮属药食同源植物,具有理气宽中,行滞消胀的功效。常用于治疗胸闷气短、肚胀疼痛、积食不化、吐痰不畅、胃下垂、脱肛及子宫下垂等。芸香柚皮苷和柚皮苷是陈皮中主要的黄酮类成分,多年研究发现,它具有多种生理活性如抗炎、抗癌和抗过敏等。目前,通常采用体内和体外两种实验方式对黄酮类化合物的抗过敏活性进行评价。本文采用RBL-2H3细胞株初步考察芸香柚皮苷与柚皮苷的抗过敏活性。结果表明,与柚皮苷相比,芸香柚皮苷对β-HEX释放的抑制作用更强。通过建立动物模型考察芸香柚皮苷对OVA诱导的过敏性哮喘的影响。结果表明,芸香柚皮苷能通过影响T细胞免疫应答实现其对OVA诱导的过敏性哮喘的干预作用。实验方法及结论:1、芸香柚皮苷与柚皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒的抑制作用。(1)MTT法考察芸香柚皮苷和柚皮苷对RBL-2H3细胞增殖活性的影响;在0.3-80μmol/L的浓度范围内,芸香柚皮苷与柚皮苷对RBL-2H3的细胞增殖活性无显著性影响;(2)考察芸香柚皮苷和柚皮苷对抗原诱导RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放β-HEX的影响;在0.3-30μmol/L的浓度范围内,芸香柚皮苷和柚皮苷抑制IgE抗原诱导RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放β-HEX呈浓度依赖性,由实验结果可知,与柚皮苷相比,芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放β-HEX具有更强的抑制作用;(3)采用ELISA法考察经芸香柚皮苷作用后,RBL-2H3细胞上清中IL-4的变化;结果显示,在3.125-12.5μmol/L的浓度范围内,芸香柚皮苷抑制RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放IL-4效果显著。2、建立动物模型考察芸香柚皮苷抗过敏活性(1)考察了芸香柚皮苷对OVA诱导过敏性哮喘小鼠模型血清中抗体水平的影响,结果表明,芸香柚皮苷能够显著降低小鼠血清中IgE、IgG1的水平;(2)考察了小鼠肺泡灌洗液中细胞因子的水平,结果表明,芸香柚皮苷能够显著降低IL-4、IL-5的水平;升高小鼠肺泡灌洗液中IFN-γ;(3)考察了芸香柚皮苷对脾脏细胞中T细胞分化的影响,结果表明,芸香柚皮苷对CD4~+和CD8~+T细胞在脾脏淋巴细胞中含量百分比的影响,结果表明,芸香柚皮苷可以显著降低脾脏中CD4~+细胞的百分比,显著升高脾脏中CD8~+细胞的百分比。(4)考察了芸香柚皮苷抑制过敏性哮喘的机制,结果表明,芸香柚皮苷能够抑制OVA诱导的p44/42和JNK通路的激活,使P-p44/42和P-JNK的表达下降。综上所述,在体外方面,与柚皮苷相比,芸香柚皮苷可以更有效抑制RBL-2H3细胞释放β-HEX,并且降低细胞培养上清液中IL-4水平,初步判断芸香柚皮苷具有较好的体外抑制肥大细胞脱颗粒的活性;在体内方面,通过动物实验,证明芸香柚皮苷显著降低血清中IgE和IgG1水平,降低肺泡灌洗液中Th2分泌的典型炎性因子IL-4和IL-5水平,升高Th1分泌的细胞因子IFN-γ,对脾脏中CD4~+和CD8~+T细胞比例有影响,并且可以抑制OVA诱导的p44/42和JNK通路的激活,对OVA诱导的过敏性哮喘具有一定的干预作用。
【图文】：
图 2.1 芸香柚皮苷对细胞增殖活性的影响Fig.2.1 The influence of Naringin of cell viabilityMTT 法是用来检测细胞活性常用的方法。噻唑蓝(MTT）是一种染料，，其能够被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为甲佨（Formazan）并沉积在细胞中。由于甲佨的生成量与活细胞数量成正比，所以可以通过甲佨的生成量反映活细胞的数量[68]。由图 2.1 可知，当芸香柚皮苷的浓度为 3.125、6.25、12.5、25、50、60、80、100 μmol/L 时，细胞活力分别为 99.5 5.9%、99.7 5.8%、98.23 7.4%、97.90 4.4%、97.35 6.5%、95.56 4.3%、94.58 4.5%、89.42 2.1%。由此可知当芸香柚皮苷的浓度低于 80 μmol/L 时，对细胞的活力影响不大。根据本实验结果，选取 3.13、6.25、12.50、25.00 和 50.00 μmol/L剂量范围研究芸香柚皮苷对抗原诱导 RBL-2H3 细胞活化脱颗粒 β-HEX 释放的影响。
图 2.2 柚皮苷对细胞增殖活性的影响Fig.2.2 The influence of Naringin of cell viability由图 2.2 可知，当柚皮苷的浓度为 3.125、6.25、12.5、25、50、60、80、100 μmol/L 时，细胞活力分别为 105.20 3.16%、102.68 1.17%、102.46 0.75%99.89 0.63%、101.56 1.09%、100.33 1.49%、96.82 1.01%、89.42 1.39%当柚皮苷的浓度低于 100 μmol/L 时，对细胞的活力影响不大。根据本实验结果选取 3.13、6.25、12.50、25.00 和 50.00 μmol/L 剂量范围研究芸香柚皮苷对抗原诱导 RBL-2H3 细胞活化脱颗粒 β-HEX 释放的影响。2.4.3 芸香柚皮苷对抗原诱导 RBL-2H3 释放β-HEX 的影响
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
本文编号：2610889
【图文】：
图 2.1 芸香柚皮苷对细胞增殖活性的影响Fig.2.1 The influence of Naringin of cell viabilityMTT 法是用来检测细胞活性常用的方法。噻唑蓝(MTT）是一种染料，，其能够被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为甲佨（Formazan）并沉积在细胞中。由于甲佨的生成量与活细胞数量成正比，所以可以通过甲佨的生成量反映活细胞的数量[68]。由图 2.1 可知，当芸香柚皮苷的浓度为 3.125、6.25、12.5、25、50、60、80、100 μmol/L 时，细胞活力分别为 99.5 5.9%、99.7 5.8%、98.23 7.4%、97.90 4.4%、97.35 6.5%、95.56 4.3%、94.58 4.5%、89.42 2.1%。由此可知当芸香柚皮苷的浓度低于 80 μmol/L 时，对细胞的活力影响不大。根据本实验结果，选取 3.13、6.25、12.50、25.00 和 50.00 μmol/L剂量范围研究芸香柚皮苷对抗原诱导 RBL-2H3 细胞活化脱颗粒 β-HEX 释放的影响。
图 2.2 柚皮苷对细胞增殖活性的影响Fig.2.2 The influence of Naringin of cell viability由图 2.2 可知，当柚皮苷的浓度为 3.125、6.25、12.5、25、50、60、80、100 μmol/L 时，细胞活力分别为 105.20 3.16%、102.68 1.17%、102.46 0.75%99.89 0.63%、101.56 1.09%、100.33 1.49%、96.82 1.01%、89.42 1.39%当柚皮苷的浓度低于 100 μmol/L 时，对细胞的活力影响不大。根据本实验结果选取 3.13、6.25、12.50、25.00 和 50.00 μmol/L 剂量范围研究芸香柚皮苷对抗原诱导 RBL-2H3 细胞活化脱颗粒 β-HEX 释放的影响。2.4.3 芸香柚皮苷对抗原诱导 RBL-2H3 释放β-HEX 的影响
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【参考文献】
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本文编号：2610889
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