扶正祛毒方干预慢性HBV携带小鼠的实验探讨

发布时间：2020-04-17 08:03

【摘要】：目的:慢性HBV携带者临床上常表现为:HBV DNA高水平复制,血清ALT和AST在正常范围,肝组织学检查通常无病变或病变轻微。患者传染性较强,可隐匿进展为肝硬化或HCC。慢性HBV携带者处于免疫耐受期,现代医学尚无针对此类患者的理想治疗手段。我国是HBV感染大国,慢性HBV携带者人数众多,疾病负担较重,解决此问题尤为重要。前期研究发现扶正祛毒方对慢性HBV携带者有抑制HBV复制的作用,并能上调IFN-γ的表达。基于以上研究,本课题组设计了以下实验,用扶正祛毒方干预HBV转基因小鼠,检测ALT、AST、HBV DNA、IFN-γ、IL-10的表达,计算脾脏指数,并观察肝组织病理,探讨扶正祛毒方对HBV复制及肝组织病理的影响,并研究其对HBV转基因小鼠免疫功能的调节作用。方法:将30只HBV转基因小鼠随机分为中药治疗组、西药治疗组和模型对照组,10只同品系正常小鼠作为空白对照组。中药治疗组予扶正祛毒方药液灌胃,西药治疗组予阿德福韦酯药液灌胃,模型对照组及空白对照组予生理盐水灌胃,各组均连续给药12周后取材。用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST水平,qPCR技术检测HBV DNA表达,计算脾脏指数,Elisa检测肝组织中的IFN-γ、IL-10水平,HE染色观察肝组织病理。结果:①ALT、AST血清均值水平:模型对照组的ALT均值水平高于其余3组,差异均有统计学意义(P0.05);中药治疗组、西药对照组与空白对照组的ALT均值水平均无明显差异(P0.05)。4组的AST均值水平无明显差异(P0.05)。②HBV DNA相对基因表达:西药治疗组和中药治疗组的HBV DNA表达无明显差异(P0.05)。③脾脏指数均值水平:空白对照组脾脏指数均值水平明显高于模型对照组,且差异具有统计学意义(P0.05);模型对照组、中药治疗组和西药治疗组脾脏指数均值水平的差异均无统计学意义(P0.05),但中、西药治疗组小鼠的脾脏指数均值水平均较模型对照组高。④IFN-γ均值水平:西药治疗组的IFN-γ均值水平明显高于其余3组,差异均具有统计学意义(P0.05);模型对照组与空白对照组IFN-γ均值水平的差异无统计学意义(P0.05);中药治疗组与模型对照组IFN-γ均值水平的差异无统计学意义(P0.05)。⑤IL-10均值水平:空白对照组的IL-10均值水平明显低于其余3组,差异均具有统计学意义(P0.05);模型对照组IL-10的均值水平低于西药治疗组,差异均具有统计学意义(P0.05);中药治疗组与模型对照组IL-10均值水平的差异无统计学意义(P0.05)。⑥肝组织病理:模型对照组小鼠肝细胞排列欠规整;部分肝细胞出现毛玻璃样变或空泡样变性;但肝组织内未见明显淋巴细胞浸润,汇管区无明显纤维增生。其余3组小鼠肝细胞排列规整,无明显病理性改变。结论:①扶正祛毒方可改善慢性HBV携带小鼠肝组织损伤,或许可以改善慢性HBV携带者的预后。②扶正祛毒方在短期内对慢性HBV携带小鼠免疫指标(IFN-γ、IL-10等)的表达无明显影响。③扶正祛毒方对慢性HBV携带小鼠或许有抑制HBV复制的作用。
【图文】：

步完善相关。２０１８年我国乙型病毒性肝炎发病数为１２２５８７７人，，死亡数为４７０人（不包逡逑括死于ＨＢＶ感染导致的肝硬化失代偿、ＨＣＣ等终末期肝病的死亡人数）。２０１１？２０１８年逡逑我国乙型病毒性肝炎发病数及死亡数如表１、图１：逡逑表１邋２０１１？２０１８年我国乙型病毒性肝炎发病数及死亡数逡逑时间邋２０１１邋年邋２０１２邋年邋２０１３邋年邋２０１４邋年邋２０１５邋年邋２０１６邋年邋２０１７邋年邋２０１８邋年逡逑发病数逦１０９３３３５逦１０８７０８６逦９６２９７４逦９３５７０２逦９３４２１５逦９４２２６８逦１００１９５２逦１２２５８７７逡逑死亡数邋６３７逦５８２逦５５０逦３６０逦３５２逦４０５逦４２５逦４７０逡逑１４０００００逦７００逡逑１２０００００逦６００逡逑１００００００逦＼逦５００逡逑８０００００逦＾逦一＂＾逦４００逡逑６０００００逦３００逡逑４０００００逦２００逡逑２０００００逦１００逡逑０逦０逡逑２０１１年邋２０１２年邋２０１３年邋２０１４年邋２０１５年邋２０１６年邋２０１７年邋２０１８年逡逑乙型肝炎发病数逦乙型肝炎死亡数逡逑图１邋２０１１？２０１８年我国乙型病毒性肝炎发病数及死亡数逡逑以上数据来自中华人民共和国Ｍ家卫生健康委员会（ｈｔ．ｔｐ：／／ｗｗｗ．邋ｎｈｃ．邋ｇｏｖ．邋ｃｎ／ｗｊｗ／ｉｎｄｅｘ．邋ｓｈｔｍｌ）逡逑除经济负担及ＨＢＶ感染后的疾病进展风险以外，ＨＢＶ感染者往往还承担着来自社会逡逑的歧视目光。这种歧视曾一度影响社会公平公正与和谐稳定，当时造成歧视的原因是多逡逑方面的

５．４逦ＩＦＮ－ｙ逡逑用Ｅｌｉｓａ法检测ＩＦＮ－ｙ，需先用标准品检测值绘制标准曲线；本实验采用Ｏｒｉｇｉｎ邋８．邋０逡逑版本４参数多项式曲线拟合绘制标准曲线，如图２所示；由标准曲线公式求得的各样品逡逑ＩＦＮ－ｙ浓度如表６所示。逡逑１．４逡逑１２邋／逡逑１逦ｙ邋＝邋０．０００７ｘ邋＋邋０．０１８５逡逑ｙ逦Ｒ２邋二邋０．邋９９８５逡逑０８逡逑０．６逡逑0４逦ｙ＊逦？系列１逡逑——线性（系逡逑０．２逡逑。／逡逑０逦５００逦１０００逦１５００逦２０００逡逑图２邋ＩＦＮ－ｙ标准曲线逡逑西药治疗组的ＩＦＮ－ｙ均值水平明显高于其余３组，差异均具有统计学意义（Ｐ＜逡逑０．０５）；模型对照组与空白对照组ＩＦＮ－ｙ均值水平的差异无统计学意义（Ｐ＞０．邋０５）；逡逑中药治疗组与模型对照组ＩＦＮ－ｙ均值水平的差异无统计学意义（Ｐ＞0．邋０５）。逡逑表６邋４组ＩＦＮ－邋丫均值水平比较逡逑空白对照组逦模型对照组逦中药治疗组逦西药治疗组逡逑ＩＦＮ－ｙ邋（ｎｇ／Ｌ）邋４３．邋１０土邋１８．邋２２逦４８．邋７５±２０．邋５０逦３９．邋６９±１２．邋０３逦６８．邋３９±１１．７５逡逑５．５逦ＩＬ－１０逡逑ＩＬ－１０的标准曲线如图３，由标准曲线公式求得的各样品ＩＬ－１０浓度如表７所示。逡逑３３逡逑
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2630639