连翘质量控制标准研究

发布时间：2020-04-24 00:17

【摘要】：连翘为木犀科植物连翘Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实,是一种传统中药。秋季果实初熟尚带绿色时采收,除去杂质,蒸熟,晒干,习称“青翘”;果实熟透时采收,晒干,除去杂质,习称“老翘”。连翘主要活性成分是连翘酯苷A和连翘苷且连翘酯苷A在连翘中含量很高,为了使薄层鉴别更加准确,在2015版《中国药典》连翘薄层鉴别项下增加连翘酯苷A作为标准对照品。由于连翘的伪品和类同品较多,只依靠薄层鉴别有时无法保证连翘正品,采用中药指纹图谱时会出现不同产地、不同采集时间和不同制药企业在同一个“指纹图谱”下控制难度大,因此为了更好的控制连翘药材品质,本文通过建立青翘和老翘HPLC特征图谱方法指认青翘和老翘的几个专属性化学成分。为了优化连翘含量测定方法,本文通过《中国药典》含量测定方法对各种连翘供试品的制备方法进行了评价,优选出了供试品的制备方法,该方法可满足同时提取连翘酯苷A和连翘苷的要求,并能达到最佳效果。同时发现连翘酯苷A和连翘苷的含量在青翘和老翘中具有显著性差异,因此,建议两者指标成分的限量值应分别制订。连翘作为一种市售商品,其品质的优劣对中成药及临床上都具有很大影响,为了进一步对连翘质量进行控制,本文将结合HPLC特征图谱、含量测定对连翘进行分级标准研究即分为青翘统货、青翘选货和老翘统货。本文研究内容如下:1.连翘薄层鉴别研究在2015版《中国药典》连翘鉴别项下增加连翘酯苷A作为标准对照品,对一系列不同展开剂进行筛选,最后采用氯仿-甲醇(8:2)、乙酸乙酯-甲酸-水(9:1.5:0.5)为二次展开条件,10%硫酸乙醇溶液为显色剂对3批青翘和2批老翘中连翘酯苷A和连翘苷进行同时鉴定。完成对该方法的重现性和耐用性研究。2.连翘HPLC特征图谱研究从制备方法简便、快速、分离度的角度对7种供试品制备方法进行筛选,优选出70%甲醇超声30min为青翘、老翘的供试品制备方法。由于青翘、老翘化学成分的差异性,对不同色谱条件进行考察后发现,共用一个色谱条件无法准确进行两者特征图谱研究,因此采用甲醇-0.3%冰乙酸水溶液梯度洗脱程序作为青翘色谱条件,乙腈-0.4%冰乙酸溶液梯度洗脱程序作为老翘色谱条件。根据特征图谱指导原则即特征成分专属性和有效成分选择了连翘酯苷I、连翘酯苷A、(+)-松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷、芦丁、连翘苷、连翘酯素作为青翘的特征峰;RS-连翘h灸拒占谆选⒙　⒘条ボ誂、连翘苷和连翘酯素作为老翘的特征峰。通过对17批青翘统货、15批青翘选货和15批老翘的HPLC特征图谱研究发现各特征峰的相对保留时间在5%以内,均符合要求。青翘统货和选货在化学成分上无明显差异但各特征峰的峰面积存在较大差异,青翘和老翘在化学成分及峰面积均存在明显差异。该研究为连翘商品规格等级标准提供较好的科学依据。3.连翘有效成分含量测定研究3.1供试品制备方法改进为了快速、简便、高效的测定连翘中连翘酯苷A和连翘苷的含量,对药典分开制备连翘酯苷A和连翘苷供试品溶液方法提出改进,即同时制备连翘酯苷A和连翘苷供试品溶液,连翘苷供试品溶液无前处理。通过对8种包括药典供试品提取方法的比较,优选出70%甲醇超声处理30min的提取方法较好。对连翘苷提取液是否经中性氧化铝柱处理也做了进一步研究,比较青翘和老翘以及经不同厂家中性氧化铝柱处理后的结果表明经中性氧化铝处理前后青翘和老翘中的连翘苷峰面积差异较小,且不经中性氧化铝柱处理的峰纯度及分离度都达到药典规定值。因此对药典供试品制备方法的改进是可行的。3.2含量测定方法考察在药典含量分开测定的情况下,为了快速进行测定,本文尝试各种简便的测定方法后将采用两种测定方法对青翘、老翘含量进行研究。我们将采用HPLC同时测定青翘中连翘酯苷A和连翘苷的方法。在许佳等人对不同色谱条件考察的基础上进一步验证及筛选,建立了以下方法:乙腈(A)-0.4%冰醋酸溶液(B)梯度洗脱,0~33 min,A-B(15:85),33~43 min,A-B(15:85)→A-B(25:75),43~60 min,A-B(25:75);检测波长为277和330 nm。该方法在测定青翘(统货、选货)中连翘酯苷A和连翘苷含量时紫外吸收强度高,分离度及纯度较好,因此该方法用于青翘(统货、选货)测定是可行的。老翘依旧采用药典方法进行测定。利用本文方法和药典方法对40批青翘统货、30批青翘选货和30批老翘统货中连翘酯苷A和连翘苷含量进行测定,研究发现两个指标性成分在青翘统货、青翘选货和老翘统货中存在差异,尤其是青翘与老翘存在显著性差异,应分别规定含量限定值,暂定青翘统货中连翘酯苷A的含量不得少于4.50%,连翘苷含量不得少于0.50%;暂定青翘选货中连翘酯苷A的含量不得少于6.00%,连翘苷的含量不得少于0.60%;暂定老翘中连翘酯苷A的含量不得少于0.35%,连翘苷的含量不得少于0.15%。这为建立连翘商品规格等级标准进一步提供科学依据。4.老翘采收期的初步研究目前大部分老翘中连翘酯苷A含量较低,连翘苷含量不达标。老翘不合格的原因可能受采收期的影响。本文按药典测定方法对平顺不同采收期的老翘净壳共5批进行含量测定研究。结果发现在2017年10月中旬至11月份老翘中两个指标性成分含量较高,随着时间的推移老翘各化学成分含量逐渐降低,我们将初步确定老翘采收期为10月中旬至11月份。
【图文】：

展开剂,甲酸,氯仿,甲醇

图 2.1 不同展开剂薄层色谱图Fig2.1 Thin layer chromatograms of different developing agents 氯仿-甲醇（7：2）B 乙酸乙酯-甲酸-水（9：2：1）C 乙酸乙酯-甲酸-水（9：1.5：0.5）氯仿-甲醇（8：2）和乙酸乙酯-甲酸-水（9：1.5：0.5）E 氯仿-甲醇-甲酸（7：2：1）氯仿-甲醇（8：2）.2.2.3 显色剂筛选

厂家,海洋化工,耐用性,薄层鉴别

图 2.2 不同厂家薄层色谱图Fig2.2 Thin layer chromatagrams from different manufacturers注：A. Mark 公司 B. 海洋化工（青岛）结果显示：不同厂家的薄层板及不同温度进行薄层鉴别后斑点位置及异，因此耐用性较好。
【学位授予单位】：山西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284.1

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