大黄素对大鼠创伤性脊髓损伤的神经保护作用研究

发布时间：2020-04-26 15:12

【摘要】：目的:1、探讨大黄素对大鼠创伤性脊髓损伤后运动功能恢复的影响。2、探讨大黄素对大鼠创伤性脊髓损伤后脊髓水肿的影响及其机制。3、探讨大黄素对大鼠创伤性脊髓损伤后氧化应激和炎症反应的影响。方法:345只SPF级健康Sprague-Dawley(SD)雌鼠被随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、大黄素低剂量治疗组(20mg·kg~(-1),C组)、大黄素中剂量治疗组(40mg·kg~(-1),D组)和大黄素高剂量治疗组(80mg·kg~(-1),E组),n=69。采用Allen’s打击法制作大鼠创伤性脊髓损伤的模型。(1)术后3d、7d、14d及28d,采用BBB(Basso Beattie Bresnahan)评分及斜板实验观察大鼠的运动功能恢复情况。(2)术后3d,采用HE(Hematoxylin and Eosin)染色观察大鼠脊髓组织的病理变化,干湿重法检测脊髓组织含水量,伊文思蓝染色法检测血-脊髓屏障(Blood-spinal cord brier,BSCB)通透性,RT-PCR和Western Blot检测水通道蛋白-4(Aquaporin-4,AQP-4)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)mRNA和蛋白表达。(3)术后7d,予以甲苯胺蓝染色观察神经元内尼氏小体情况;予以透射电镜观察脊髓神经纤维的改变;Western Blot检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、NAD(P)H醌氧化还原酶1(NAD(P)H:quinine oxidoreductase 1,NQO1)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)蛋白表达;ELISA检测脊髓组织肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的含量;免疫荧光观察GFAP、神经元胶原抗原2(neuronglialantigen-2,NG2)、巨噬/小胶质细胞(Ectodermal Dysplasia-1,ED-1)的表达情况。结果:(1)BBB评分及斜板实验检测结果显示,术后7d、14d、28d,C组、D组、E组均显著高于B组(P0.05),且E组最佳(P0.05)。(2)术后3d,HE染色显示,B组损伤节段内出现大片出血灶,神经细胞肿胀、破坏,大量炎性细胞浸润,组织间隙增宽,水肿严重,C组、D组、E组上述病理改变较B组改善,其中E组改善最明显;脊髓组织含水量B组与D组、E组间,以及C组、D组、E组间差异均有统计学意义(P0.05);C组、D组、E组的脊髓伊文思蓝含量较B组明显降低(P0.05),AQP-4和MMP-2 mRNA的蛋白表达,C组、D组、E组与B组比较明显降低(P0.05),但MMP-2 mRNA的表达,C组与D组间差异无统计学意义(P0.05)。(3)术后7d,B组、C组尼氏小体开始融合,D组、E组较B组、C组融合明显减轻;透射电镜结果显示,B组、C组脊髓神经纤维出现明显脱髓鞘改变,D组、E组髓鞘变性较B组、C组减轻;Western Blot检测,Nrf2、HO-1、GFAP、NF-κB的蛋白表达,C组、D组、E组与B组之间比较,NQO1蛋白表达,D组、E组与B组之间比较,差异均有统计学意义(P0.05)。ELISA检测结果显示,C组、D组、E组TNF-α、IL-6含量较B组,D组、E组IL-1β含量较B组均显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。免疫荧光显示,C组、D组、E组GFAP、NG2的表达较B组增加,D组、E组更明显;C组、D组、E组ED-1的表达较B组显著降低。结论:1、大黄素能促进大鼠创伤性脊髓损伤后肢体功能的康复。2、大黄素能减轻大鼠创伤性脊髓损伤后的脊髓水肿,这可能与大黄素能下调脊髓损伤后脊髓组织AQP-4和MMP-2的表达,降低BSCB通透性有关。3、大黄素对大鼠创伤性脊髓损伤后的脊髓神经细胞具有保护作用,其机制可能与激活Nrf2-ARE抗氧化应激通路,降低NF-κB、ED-1、TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子的表达,促进GFAP、NG2表达有关。
【图文】：

附图 1 模型制备及损伤大鼠图片Fig.1 Model preparation and the rat after SCI.3 714 280510152025②②②②②②②②②②②②②②②t / d①①①①②②BB评图 2 创伤性脊髓损伤后不同时间段 BBB 评分（n=6，x ±s）①P＜0.05，与 A 组比较；

3 714 280204060CDEt / d②②②②②②②②②②②②①①①①②②斜斜斜（斜°）图 3 创伤性脊髓损伤后不同时间段斜板实验评分（n=6，x ±s）①P＜0.05，与 A 组比较；②P＜0.05，与 B 组比较；③P＜0.05，与 C 组比较；④P＜0.05, 与 D 组比较Fig.3 The slope measurements on the 3rd, 7th, 14th, and 28thday after traumatic spinal cordinjury (n=6，，x ±s).①P＜0.05, VS group A;②P＜0.05, VS group B;③P＜0.05, VS group C;④P＜0.05, VS group DA B C
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2641623