8-辛基小檗碱对急性肝损伤的保护作用及其机制研究

发布时间：2020-04-27 10:42

【摘要】：急性肝损伤(ALF)是一种伴有严重肝细胞坏死及肝功能衰竭的临床综合征,具有极高的死亡率。但目前,除了肝移植仍没有有效的治疗手段。因此,寻找安全有效的防治方法有重要意义。本论文以昆明小鼠和L02细胞为模型,研究了8-辛基小檗碱(OBBR)对急性肝损伤的保护作用及其作用机制,为寻找预防急性肝损伤的药物提供理论基础。本研究的主要内容和结果如下:(1)探究了8-辛基小檗碱的安全性。对昆明小鼠的急性毒性试验结果表明8-辛基小檗碱的LD_(50)值约为720.138 mg/kg;在对SD大鼠的亚慢性毒性研究中,与对照组相比,药物组大鼠的重要脏器指数(心、肝、脾、肺、肾等)及血液学检测结果均没有显著性变化。因此,8-辛基小檗碱是一种相对安全的化合物。(2)在体内实验中,运用D-GalN/LPS诱导的急性肝损伤小鼠模型研究了8-辛基小檗碱对急性肝损伤的保护作用。观察统计了8-辛基小檗碱对D-氨基半乳糖/脂多糖(D-GalN/LPS)诱导的小鼠死亡率的影响;对肝脏组织进行了病理学观察;检测了各组小鼠血清丙氨酸转移酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的活性;检测了小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)及C-反应蛋白(CRP)的表达和肝脏组中织环氧化酶-2(COX-2)和一氮化氮合酶(iNOS)的表达;同时检测了小鼠肝脏组织谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)的表达和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。实验结果表明,8-辛基小檗碱提高了D-GalN/LPS诱导的小鼠存活率;改善了D-GalN/LPS引起的病理学改变;抑制了D-GalN/LPS诱导的血清ALT和AST活性的升高;降低了D-GalN/LPS诱导的小鼠血清中TNF-α、IL-6及CRP的表达和肝脏组织中COX-2及iNOS的表达;并抑制了D-GalN/LPS诱导的肝脏组织MDA的产生和GSH、SOD的消耗。这些结果一致表明,8-辛基小檗碱对急性肝损伤有保护作用。(3)基于网络药理学的原理,根据反向药效团匹配方法预测了8-辛基小檗碱的潜在作用靶点。利用计算机系统生物学方法及网络可视化软件,构建了“药物-靶点-疾病”网络。结果表明,8-辛基小檗碱的药理作用集中于代谢性性疾病、癌症、免疫性疾病等,与各种肝脏疾病及炎症之间也具有显著性关系。KEGG通路分析及配体受体相互作用结果表明,8-辛基小檗碱可能通过抑制MAPK及NF-κB信号通路而对急性肝损伤起保护作用。(4)在体外实验中,利用LPS诱导的L02细胞作为急性肝损伤模型对8-辛基小檗碱的肝保护作用机制进行了探究。首先利用MTT法分析了8-辛基小檗碱对L02细胞增殖的影响。实验结果表明,8-辛基小檗碱浓度小于0.1μg/mL时对L02细胞没有明显的影响,其存活率达85%以上,其IC_(50)值为1.28μg/mL。体外实验结果表明,8-辛基小檗碱降低了LPS诱导的L02细胞中细胞因子如TNF-α及COX-2的表达,这说明8-辛基小檗碱对LPS诱导的L02细胞具有保护作用。采用qRT-PCR方法对LPS诱导的L02细胞中通路相关基因的表达进行了分析,结果表明,8-辛基小檗碱抑制了LPS诱导的TLR4、ERK、p38、JNK及NF-κB的mRNA表达。同时,利用Western Blot方法分析了8-辛基小檗碱对信号通路中相关蛋白的影响,结果表明,8-辛基小檗碱抑制了LPS诱导的TLR4、p-ERK、p-p38和p-JNK表达的增加,同时,8-辛基小檗碱抑制了LPS诱导的NF-κB从细胞质向细胞核的转移。综上所述,8-辛基小檗碱对急性肝损伤有较好的保护作用,并有可能作为一种新型的急性肝损伤防治药物。
【图文】：

图 1-2 8-辛基小檗碱的结构式Fig 1-2 Chemical structure of 8-octyl berberine有多种药理作用，但其生物利用度较低。8代衍生物，8-辛基小檗碱与小檗碱具有高

图 4-1 8-辛基小檗碱对 D-GalN/LPS 诱导的小鼠存活率的影响Fig 4-1 Effect of 8-octyl berberine on the survival rate of mice induced by D-GalN/LPSNote: Mice were orally administered saline or 8-octyl berberine (15 and 30 mg/kg) for 7 consecutive days beforeD-GalN/LPS injection. The survival rate were observed within 24 h after D-GalN/LPS injection.**p < 0.01 versuscontrol group;##p < 0.01 versus GaIN/LPS group. D-GalN/LPS, D-galactosamine/lipopolysaccharide. OBBR, 8-octylberberine.
【学位授予单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2642177