【摘要】：目的:观察人参皂苷Rh1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7增殖和侵袭能力的影响,并比较人参皂苷Rh1对两种细胞系抑制作用强弱。探究人参皂苷Rh1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中DDIT3和HYAL1、PLD1三种基因表达的影响,验证人参皂苷Rh1对乳腺癌的抑制作用并探讨可能的作用靶点。材料与方法:人参皂苷Rh1分别作用于三阴型乳腺癌细胞MDA-MB-231和luminal A型型人乳腺癌细胞MCF-7,观察其对两种乳腺癌细胞的抑制作用,计算抑制率,通过Origin软件得到半抑制浓度(IC50);根据IC50计算合理的最佳药物浓度作用于细胞,采用MTT法检测细胞的增殖能力;通过Transwell小室观察细胞侵袭力;细胞成球实验观察细胞活性及增殖转移能力;RT-PCR法检测细胞中的DDIT3和HYAL1、PLD1的表达,探讨这些基因在乳腺癌细胞中差异性表达对乳腺癌的增殖、转移是否有调控作用,从而找到人参皂苷Rh1在乳腺癌中可能的作用靶点。结果:1.研究发现人参皂苷Rh1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7均有抑制作用,其中人参皂苷Rh1对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的抑制作用较强,最大抑制率达到82.66%,IC50在0.59-0.64×10~(-3)mol/L之间,而MCF-7细胞的最大抑制率为80.46%,IC50在0.63-0.71×10~(-3)mol/L之间,IC50的数值越大反而抑制作用越弱。2.研究发现当人参皂苷Rh1浓度分别为250μM、500μM、750μM时对人乳腺癌细胞MDA-MB-231/MCF-7的最大抑制率分别为23.31%/18.93%、43.18%/39.53%、82.45%/80.39%,可见当人参皂苷Rh1浓度为750μM时对肿瘤细胞抑制作用最为明显,差异有统计学意义(P0.05),而且随着药物作用时间的延长抑制作用也随之增强,说明人参皂苷Rh1有明显的浓度依赖性和时间依赖性。我们选择人参皂苷Rh1浓度750μM时绘制细胞生长曲线,相同浓度的人参皂苷Rh1抑制MDA-MB-231细胞增殖作用强于MCF-7细胞,差异有统计学意义(P0.05)。3.统计24小时穿过基底膜的细胞数目,结果显示:MDA-MB-231实验组(21±1.14)、MDA-MB-231对照组(85.6±2.18);实验组与对照组相比差别有统计学意义(P0.05);MCF-7实验组(25.7±1.25),MCF-7对照组(84.8±1.37),实验组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。对比人参皂苷Rh1对MDA-MB-231细胞侵袭能力抑制率(75%)与对MCF-7细胞侵袭能力抑制率(69%)差异有统计学意义。4.本实验发现人参皂苷Rh1对肿瘤细胞成球能力有影响,一周后拍照对比发现对照组细胞成球率明显高于实验组,差异有统计学意义(P0.05)。对比发现MDA-MB-231实验组成球率较MCF-7实验组低,差异有统计学意义(P0.05)。5.RT-PCR检测发现人参皂苷Rh1使两种细胞中的DDIT3、HYAL1、PLD1基因差异表达,但只有HYAL1的低表达有统计学意义。结论:1.本实验中人参皂苷Rh1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7细胞活性均有抑制作用,其中人参皂苷Rh1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用较强,IC50的数值在600-700μM之间。2.本实验中人参皂苷Rh1有明显的浓度依赖性和时间依赖性,当人参皂苷Rh1浓度750μM时对人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7的增殖抑制作用最强,随着药物作用时间的延长抑制作用也随之增强。相同浓度的人参皂苷Rh1抑制MDA-MB-231细胞增殖作用强于MCF-7细胞,差异有统计学意义(P0.05)。3.本实验中人参皂苷Rh1降低人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞的活力,影响细胞的增殖和侵袭能力,对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的增殖和转移有抑制作用,且对MDA-MB-231细胞的抑制作用强于MCF-7细胞。4.本实验中人参皂苷Rh1对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的成球能力均有抑制作用,说明人参皂苷Rh1可能对乳腺癌细胞的干性有影响。5.基因HYAL1可能是人参皂苷Rh1抑制乳腺癌生物学行为的作用靶点。
【图文】：
图 1.不同浓度人参皂苷 Rh1 对细胞增殖抑制率 图 2. 人参皂苷 Rh1750μM 时的细胞生长曲线.Transwell 实验结果：人参皂苷 Rh1 浓度为 750μM 处理细胞，培养 24h 后实验结果拍照并检测侵袭数目果显示：MDA-MB-231 实验组（21±1.14）、MDA-MB-231 对照组（85.6±2.18）；组与对照组相比差别有统计学意义（P<0.05）；MCF-7 实验组（25.7±1.25），MC照组（84.8±1.37），实验组与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。对比人苷 Rh1 对 MDA-MB-231 细胞侵袭能力抑制率（75％）与对 MCF-7 细胞侵袭能力抑制69％）有差异，，且差异有统计学意义。下图（图 3、图 4）对比了 MDA-MB-231 细胞未经人参皂苷 Rh1 作用与经人参皂苷 用后的细胞侵袭迁移能力，可以明显的看出经人参皂苷 Rh1 作用后的细胞数量明显，说明人参皂苷 Rh1 对人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞的侵袭迁移能力有抑制作用。
图 1.不同浓度人参皂苷 Rh1 对细胞增殖抑制率 图 2. 人参皂苷 Rh1750μM 时的细胞生长曲线.Transwell 实验结果：人参皂苷 Rh1 浓度为 750μM 处理细胞，培养 24h 后实验结果拍照并检测侵袭数目果显示：MDA-MB-231 实验组（21±1.14）、MDA-MB-231 对照组（85.6±2.18）；组与对照组相比差别有统计学意义（P<0.05）；MCF-7 实验组（25.7±1.25），MC照组（84.8±1.37），实验组与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。对比人苷 Rh1 对 MDA-MB-231 细胞侵袭能力抑制率（75％）与对 MCF-7 细胞侵袭能力抑制69％）有差异，且差异有统计学意义。下图（图 3、图 4）对比了 MDA-MB-231 细胞未经人参皂苷 Rh1 作用与经人参皂苷 用后的细胞侵袭迁移能力，可以明显的看出经人参皂苷 Rh1 作用后的细胞数量明显，说明人参皂苷 Rh1 对人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞的侵袭迁移能力有抑制作用。
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
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本文编号：2653132
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