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青藤碱对紫杉醇致痛作用和抗肿瘤效应的影响

发布时间:2020-05-07 15:56
【摘要】:目的:探讨青藤碱(SIN)对紫杉醇(PT)所致的病理性疼痛及其抗肿瘤效应的影响,为SIN的开发利用和PT的临床合理使用提供提供实验依据。方法:1.为考察SIN单次给药对PT引起的神经病理性疼痛的影响,将45只SD大鼠(200±20 g)随机分为5组(每组9只):对照组(A组),PT组(B组),PT+SIN 10 mg/kg组(C组),PT+SIN 20 mg/kg组(D组),PT+SIN 40 mg/kg组(E组)。B、C、D、E组大鼠在第1、3、5和7 d分别腹腔注射PT(2 mg/kg,每天1次)制备神经病理性疼痛模型,A组大鼠注射等体积溶媒。第9 d,C、D、E组大鼠分别腹腔注射SIN 10、20和40 mg/kg(每天1次),A、B组大鼠分别腹腔注射等体积生理盐水。采用机械刺激法和热刺激法分别在第-1 d、8 d和第9 d注射SIN后的0、60、180、240 min测定大鼠机械刺激缩足阈值(MWT)和热刺激缩足潜伏期(TWL)。2.为考察SIN多次给药对PT引起的神经病理性疼痛的影响,将40只小鼠(20±2 g)随机分为4组(每组10只):对照组(A组),PT组(B组),PT+SIN 40 mg/kg组(C组),PT+SIN 80 mg/kg组(D组)。B、C、D组小鼠在第1、3、5和7 d分别腹腔注射PT(4 mg/kg,每天1次),A组小鼠注射等体积溶媒。另外,在第1至15 d,C、D组小鼠分别腹腔注射SIN 40和80 mg/kg(每天1次),A、B组小鼠分别腹腔注射等体积生理盐水。采用机械刺激法和热刺激法分别分别从-1 d开始直至第16 d每两天测定一次小鼠MWT和TWL。3.为考察SIN对PT抗肿瘤效应的影响及其机制,首先采用MTT法检测不同浓度的SIN和PT分别单独作用24、48和72 h后对胰腺癌BXPC3细胞活力的影响;然后将SIN和PT按一定比例联合作用于胰腺癌BXPC3细胞48h,测定其抑制率和联合指数(Combined Index,CI);最后采用蛋白免疫印迹法测定SIN和PT分别单独和联合作用于胰腺癌BXPC3细胞后AKT和mTOR表达及其磷酸化水平的变化。结果:1.SIN单次给药对PT引起的大鼠神经病理性疼痛的影响的实验结果显示:与对照组比较,PT组的MWT和TWL在注射PT后明显降低,具有显著性差异(p0.01);与PT组比较,PT+SIN 10 mg/kg组各时间点的MWT和TWL均没有明显差别,而PT+SIN 20 mg/kg组和PT+SIN 40 mg/kg组的MWT和TWL在注射SIN后均明显增加(p0.05或p0.01),且PT+SIN 40 mg/kg组的MWT增加的幅度和持续的时间均明显高于PT+SIN 20 mg/kg组。2.SIN多次给药对PT引起的小鼠神经病理性疼痛的影响的实验结果显示:与对照组比较,PT组的MWT和TWL分别从第4d和第8 d开始降低,第10 d至16 d均具有显著性差异(p0.01或p0.05)。与PT组比较,PT+SIN 40 mg/kg和PT+SIN 80 mg/kg组的MWT分别从第4d开始增加,第4 d至16 d均具有显著性差异(p0.01),而TWL分别从第8 d开始增加,第10 d至16 d均具有显著性差异(p0.01);PT+SIN 40 mg/kg组和PT+SIN 80 mg/kg组的MWT和TWL均没有随着时间的延长而降低。3.SIN对PT抗肿瘤效应的影响的实验结果显示:不同浓度的SIN(0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mmol/L)和不同浓度的PT(10、20、40、80、160 nmol/L)分别作用24、48及72 h后对胰腺癌BXPC3细胞增殖均出现抑制作用;SIN和PT按一定浓度比例(25000∶1)联用对胰腺癌BXPC3细胞增殖的抑制作用明显高于单用SIN或PT。不同浓度的PT(10、20、40、80、160 nmol/L)联用SIN(1.5 mmol/L)的抑制率明显高于单用PT,产生相同抑制率时联用SIN所需的PT浓度明显低于单用PT。无论SIN和PT单用还是联用,p-AKT和p-mTOR的表达水平均显著性降低(p0.05 vs control);PT与SIN联用后p-AKT和p-mTOR表达水平均明显低于单用PT(p0.05 vs PT)。结论:1.SIN单次给药可缓解PT诱导的神经病理性疼痛,其镇痛效应和持续时间呈现剂量依赖性,但镇痛作用持续时间不长。2.SIN多次给药能产生持续平稳地镇痛作用,有效缓解紫杉醇引起的病理性疼痛而不产生耐受性。3.PT与SIN联用产生协同抗肿瘤效应,联用SIN可减少PT的用量而不改变其抗肿瘤效应,其机制可能与其抑制AKT/mTOR信号通路有关。
【图文】:

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图 1 青藤碱对紫杉醇引起的大鼠机械刺激缩足阈值(MWT)的影响(注:#p<0.05,##p<0.01 VS control;*p<0.05,**p<0.01, VS PT)。1.2 青藤碱单次给药对紫杉醇引起的大鼠热刺激痛的影响为进一步证实青藤碱单次给药可缓解紫杉醇引起的疼痛反应,接下来采用热刺激法测定了紫杉醇引起的疼痛反应以及青藤碱的镇痛效果。热刺激痛阈值测定结果显示,PT 组大鼠的 TWL 在第 8 d 和第 9 d 均明显降低,与 control 组比较具有显著性差异(图 2 A,p<0.01),表明紫杉醇诱导疼痛模型成功。与 PT 组比较,PT + SIN 10 mg/kg 组大鼠各时间点的 TWL 均没有明显差别(图 2 B);而PT + SIN 20 mg/kg 组大鼠的 TWL 在注射 SIN 后 120 min 明显增加(图 2 C,p<0.01),180 min 后不再增加;PT + SIN 40 mg/kg 组在注射 SIN 后 120 和 180 min的 MWT 均明显增加,且在 120 min 达峰值,240 min 后不再增加(图 2 D,p<0.05或 p<0.01)。PT + SIN 20 mg/kg 组与 PT + SIN 40 mg/kg 组大鼠的 TWL 均在注射 SIN 后 120 min 出现峰值,但峰值的幅度没有明显差别。但令人意外的是,PT+ SIN 20 mg/kg 组与 PT + SIN 40 mg/kg 组在注射 SIN 后第 60 和 240min 的 TWL

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图 2 青藤碱对紫杉醇引起的大鼠热痛缩足阈值(TWL)的影响(注:#p<0.05,##p<0.01 VS control;*p<0.05,**p<0.01 VS PT)。2 青藤碱多次给药对紫杉醇引起的神经病理性痛的影响由图 1 和图 2 可知,青藤碱单次给药可缓解紫杉醇引起的神经病理性痛,,但镇痛作用持续时间不长。为考察 SIN 多次给药是否能持续缓解 PT 引起的神经病理性疼痛,本实验采用小鼠在第 1、3、5、7 d 分别腹腔注射 PT(4 mg/kg,每天1 次)制备神经病理性疼痛模型,在第 1 至 15 d 连续腹腔注射 SIN(40 或 80 mg/kg,每天 1 次),然后分别从-1 d 开始每两天测定一次小鼠 MWT 值和 TWL 值,直至第 16 d。给药时间和测定痛阈时间如表 2 所示。表 2 紫杉醇(PT)造模和青藤碱(SIN)多次给药及痛阈测定时间表实验时间(d) -1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16腹腔注射 PT + + + +
【学位授予单位】:湖北科技学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R285.5

【参考文献】

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1 银联飞;韦婷婷;黄容容;杨璨瑜;苏盈;韦山;沈让;宾晓芸;;紫杉醇诱导大鼠神经病理性疼痛模型的建立[J];右江民族医学院学报;2015年03期

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4 范宏刚;刘焕奇;卢德章;胡魁;张建涛;王洪斌;;麻醉性镇痛药研究进展[J];动物医学进展;2008年01期



本文编号:2653201

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