【摘要】：实验目的:解剖学肝脏为机体重要的消化代谢器官,与中医学“脾主运化”的功能相关性很高,“运化”其中包括运化水湿的功能,AQPs可控制水在细胞的进出,故肝脏AQPs的功能与中医学“健脾利湿”、“疏导水液”息息相关。本实验通过对湿阻中焦证大鼠肝脏内AQP-1和AQP-4的分布、定量、活性及调控方式的系统研究,探究湿阻中焦证对AQP-1和AQP-4的影响,以及平胃散是否通过影响AQPs的表达分布来调控水液代谢状态,揭示湿阻中焦证引起细胞水液代谢失衡的部分分子机制和平胃散在调控细胞跨膜水转运方面的作用靶点。其中选择AQP-1、AQP-4作为研究的原因是:前期实验研究发现AQP-1、AQP-4在肝、肺、肾、胃肠道都有表达,为共同表达的AQPs,且这几个脏器与水液代谢密切相关,因为其他脏器前期都有研究~([1]),此次选择肝脏内AQP-1和AQP-4研究以期达到多脏器共同评价的目的。故为了研究AQPs的表达规律以及湿阻中焦对AQPs的影响,此次研究特别选择这两个蛋白进行探究。实验方法:辨证论治中,“湿阻中焦证”动物模型选用20天成熟的大鼠造模,再检测大鼠胃残留率和肠推进率,然后检测:1.实施化学比色法检测确定肝脏钠离子-钾离子-三磷酸腺苷酶活性,2.实施间苯三酚法检测确定D-木糖的相关含量,3.实施酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肝组织中AQP-1、AQP-4含量,4.实施平均光密度测定法,免疫组织化学SP法,PCR和AQPs磷酸化法测定肝组织中AQP-1和AQP-4的表达。实验结果:1建立“湿阻中焦证”大鼠实验模型:(1)一般观察现象:模型组每只大鼠的体重均有显著减轻,食物摄入量和饮水量显着降低,精神状态差。(2)实验指标检测:动物模型组大鼠胃部食物代谢不通畅,排不净,血清D-木糖含量下降,钠离子-钾离子-三磷酸腺苷酶活性下降。(3)用平胃散对模型组大鼠给予药物治疗:模型组大鼠的食物摄入量、饮水摄入量、个体体重、胃内残留率、肠内推进率,血清D-木糖摄入量和钠离子-钾离子-三磷酸腺苷酶活性均有显著变化,因此可知,动物实验“湿阻中焦证”大鼠模型的制造具有科学真实性。2解剖学肝脏内AQP-1、AQP-4的含量(1)动物实验造模完成后,与空白组对照比较分析;动物模型组的大鼠AQPs含量降低,即肝脏AQP-1,AQP-4和钠离子,钾离子,三磷酸腺苷降低。(2)用药物平胃散对大鼠治疗后,平胃散治疗组大鼠AQPs水平与自然恢复组相比较,其有所增加,即肝脏AQP1,AQP4和钠离子,钾离子,三磷酸腺苷酶水平升高。(3)与模型组比较,经过自然恢复后,大鼠肝脏AQP-1在自然恢复组含量上升,大鼠AQPs肝脏钠离子,钾离子,三磷酸腺苷酶在自然恢复组含量下降。3解剖学肝脏内AQP-1,AQP-4蛋白的表达分布(1)动物实验造模完成后,与空白组相比分析,动物模型组的大鼠AQPs表达提高,即肝脏AQP-1,AQP-4表达提高。(2)用药物平胃散对大鼠治疗后,平胃散治疗组大鼠AQPs与自然恢复组相比较,其蛋白表达有明降低,即肝脏AQP-1,AQP-4表达下降。(3)与模型组比较,通过自然恢复后,大鼠肝脏AQP-1在自然恢复组表达提高,大鼠AQP-4在自然恢复组表达下调。实验结论(1)平胃散能够改善解剖学肝脏内AQP-1、AQP-4的蛋白表达和含量的分布水平,可以调剂钠离子,钾离子,三磷酸腺苷酶活性。(2)平胃散可以调控机体能量代谢和水液代谢输布,这或许是平胃散具有燥湿运脾的作用机理之一。(3)湿阻中焦证模型既可以影响机体能量代谢,还可以影响肝脏内AQP-1和AQP-4的蛋白含量和蛋白表达情况,这也是动物实验“湿阻中焦证”模型大鼠机体内津液代谢紊乱的原理。
【图文】：
大鼠造模箱
造模大鼠
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【参考文献】
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