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雷公藤红素对骨肉瘤细胞系HOS中膜联蛋白A3表达的影响

发布时间:2020-05-13 17:54
【摘要】:目的:研究雷公藤红素对人骨肉瘤细胞系HOS中膜联蛋白A3(Annexin A3,ANXA3)表达的影响及对骨肉瘤细胞抑制的作用机制,为骨肉瘤免疫靶向治疗寻求新方法。方法:先用Western blot法检测成骨细胞及骨肉瘤HOS、U2OS细胞中ANXA3表达水平,然后选取各浓度的雷公藤红素干预培养骨肉瘤HOS细胞,通过相差显微镜观察各组细胞形态改变并拍照。用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法分析各浓度药物对人骨肉瘤细胞增殖活性的影响,再用Western blot法检测各组细胞中ANXA3及自噬特异性蛋白LC3B的表达水平,最后通过流式细胞术检测人骨肉瘤HOS细胞凋亡率。结果:通过Western blot法证实ANXA3在成骨细胞及骨肉瘤细胞HOS、U2OS中表达,并且在HOS、U2OS细胞中表达较成骨细胞显著升高,以HOS细胞尤为明显。雷公藤红素可改变人骨肉瘤细胞形态结构,抑制人骨肉瘤细胞HOS增殖,具有浓度依赖性,并促进人骨肉瘤细胞凋亡,激活自噬特异性蛋白LC3B,抑制ANXA3表达。结论:雷公藤红素通过抑制ANXA3表达,激活自噬特异性蛋白LC3B,抑制骨肉瘤细胞HOS生长,诱导人HOS细胞凋亡,高浓度雷公藤红素可有效杀灭人骨肉瘤HOS细胞。
【图文】:

成骨细胞,骨肉瘤,底面积


2 结果2.1 细胞生长情况光学显微镜下观察到细胞贴壁生长,细胞形状似梭型或叶状,满,,胞核呈圆形,爱抱团生长。骨肉瘤细胞生长较成骨细胞迅速,U2OS 细胞传代 12h 后生长占瓶底面积约 50%,传代 36h 后占瓶底70-80%。成骨细胞传代 12h 后生长占瓶底面积约 30%,传代 48h 后面积约 50%,传代 72 小时后占瓶底面积约 70%。2.2 成骨细胞及骨肉瘤 HOS、U2OS 细胞中 ANXA3 的蛋白表达本实验通过 Western blot 证实 ANXA3 在成骨细胞,骨肉瘤 HOS细胞中均表达,且在骨肉瘤 HOS、U2OS 细胞中,ANXA3 表达量明骨细胞中升高,其中 HOS 细胞表达最高,各组间 ANXA3 表达水平具有统计学意义(P<0.05,图 1,2)。

雷公藤红素,肉瘤,浓度


图 3 雷公藤红素作用下骨肉瘤 HOS 细胞形态学改变(10×10)Figure 3 Morphological changes of HOS cells induced by Celastrol2.5 雷公藤红素抑制 ANXA3 表达该实验证实,随着药物浓度增加,骨肉瘤 HOS 细胞中 ANXA3 蛋白表达逐渐降低,呈浓度依耐性,当雷公藤红素浓度为 0.125μmol/L、0.25μmol/L时,两组间 ANXA3 表达无统计学差异(P>0.05,图 4、图 5),当雷公藤红素浓度为 0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L 时,各组间 ANXA3 表达有统计学差异(P<0.05,图 4、图 5)。随着药物浓度增加,自噬特异性蛋白 LC3B 表达逐渐升高,0.125μmol/L 与 0.25μmol/L 浓度组差异无统计学意义(P>0.05,图 4、图 5), 当雷公藤红素浓度为 0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L 时,各组间 ANXA3 表达有统计学差异(P<0.05,图 4、图 5)。
【学位授予单位】:桂林医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R285.5

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