雷公藤红素对骨肉瘤细胞系HOS中膜联蛋白A3表达的影响

发布时间：2020-05-13 17:54

【摘要】：目的:研究雷公藤红素对人骨肉瘤细胞系HOS中膜联蛋白A3(Annexin A3,ANXA3)表达的影响及对骨肉瘤细胞抑制的作用机制,为骨肉瘤免疫靶向治疗寻求新方法。方法:先用Western blot法检测成骨细胞及骨肉瘤HOS、U2OS细胞中ANXA3表达水平,然后选取各浓度的雷公藤红素干预培养骨肉瘤HOS细胞,通过相差显微镜观察各组细胞形态改变并拍照。用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法分析各浓度药物对人骨肉瘤细胞增殖活性的影响,再用Western blot法检测各组细胞中ANXA3及自噬特异性蛋白LC3B的表达水平,最后通过流式细胞术检测人骨肉瘤HOS细胞凋亡率。结果:通过Western blot法证实ANXA3在成骨细胞及骨肉瘤细胞HOS、U2OS中表达,并且在HOS、U2OS细胞中表达较成骨细胞显著升高,以HOS细胞尤为明显。雷公藤红素可改变人骨肉瘤细胞形态结构,抑制人骨肉瘤细胞HOS增殖,具有浓度依赖性,并促进人骨肉瘤细胞凋亡,激活自噬特异性蛋白LC3B,抑制ANXA3表达。结论:雷公藤红素通过抑制ANXA3表达,激活自噬特异性蛋白LC3B,抑制骨肉瘤细胞HOS生长,诱导人HOS细胞凋亡,高浓度雷公藤红素可有效杀灭人骨肉瘤HOS细胞。
【图文】：

成骨细胞,骨肉瘤,底面积

2 结果2.1 细胞生长情况光学显微镜下观察到细胞贴壁生长，细胞形状似梭型或叶状，满，，胞核呈圆形，爱抱团生长。骨肉瘤细胞生长较成骨细胞迅速，U2OS 细胞传代 12h 后生长占瓶底面积约 50%，传代 36h 后占瓶底70-80%。成骨细胞传代 12h 后生长占瓶底面积约 30%，传代 48h 后面积约 50%，传代 72 小时后占瓶底面积约 70%。2.2 成骨细胞及骨肉瘤 HOS、U2OS 细胞中 ANXA3 的蛋白表达本实验通过 Western blot 证实 ANXA3 在成骨细胞，骨肉瘤 HOS细胞中均表达，且在骨肉瘤 HOS、U2OS 细胞中，ANXA3 表达量明骨细胞中升高，其中 HOS 细胞表达最高，各组间 ANXA3 表达水平具有统计学意义（P<0.05，图 1，2）。

雷公藤红素,肉瘤,浓度

图 3 雷公藤红素作用下骨肉瘤 HOS 细胞形态学改变（10×10）Figure 3 Morphological changes of HOS cells induced by Celastrol2.5 雷公藤红素抑制 ANXA3 表达该实验证实，随着药物浓度增加，骨肉瘤 HOS 细胞中 ANXA3 蛋白表达逐渐降低，呈浓度依耐性，当雷公藤红素浓度为 0.125μmol/L、0.25μmol/L时，两组间 ANXA3 表达无统计学差异（P>0.05,图 4、图 5），当雷公藤红素浓度为 0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L 时，各组间 ANXA3 表达有统计学差异（P<0.05,图 4、图 5）。随着药物浓度增加，自噬特异性蛋白 LC3B 表达逐渐升高，0.125μmol/L 与 0.25μmol/L 浓度组差异无统计学意义（P>0.05，图 4、图 5）, 当雷公藤红素浓度为 0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L 时，各组间 ANXA3 表达有统计学差异（P<0.05,图 4、图 5）。
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【相似文献】