新藤黄酸PEG化脂质体的制备、体内外抗肿瘤药效学、初步药动学研究

发布时间：2020-05-20 08:22

【摘要】：藤黄(Gamboge)系藤黄科植物藤黄树所分泌的树脂。新藤黄酸(Gambogenic acid,GNA)是从藤黄中分离得到的重要成分。GNA抗癌谱广、抗癌活性强、在体内外具有较强的抗肿瘤活性。然而,其血管刺激性大、半衰期短、水溶性差缺点限制了其临床应用。目的:本课题采用PEG化脂质体包裹GNA,以期减小GNA的血管刺激性、延长半衰期、增强体内外抗肿瘤活性。方法:(1)本课题采用注入法制备新藤黄酸PEG化脂质体(GNA-PEG-LPs),利用单因素考察和正交试验优化处方与工艺;从外观形态、包封率、载药量、粒径分布、DSC、Zeta电位、稳定性试验、体外释放试验等方面进行GNA-PEG-LPs表征和质量评价;(2)选用人肺癌A549细胞、人胃癌SGC-7901细胞、人肝癌HepG2细胞,通过MTT实验、DAPI染色、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测、Western blot等试验考察GNA-PEG-LPs的细胞药效学;(3)采用家兔耳缘静脉血管刺激性试验、溶血性试验来评价GNA-PEG-LPs的安全性;(4)采用LLC荷瘤小鼠模型,评价GNA-PEG-LPs的体内抗肿瘤药效学,对肿瘤组织进行免疫组化检测相关凋亡蛋白的变化,并对给药后小鼠主要器官进行HE染色初步评估GNA-PEG-LPs的安全性;(5)采用SD大鼠单次给药,比较GNA和GNA-PEG-LPs在大鼠体内的药动学参数差异。结果:(1)GNA-PEG-LPs最优工艺处方的包封率为(88.13±1.31)%,载药量为(3.72±0.04)%;在透射电镜下观察发现所得的脂质体为规则的球形,GNA-PEG-LPs的平均粒径为(90.13±0.16)nm,PDI值为(0.092±0.003),Zeta电位为(-22.10±0.20)mV;DSC分析结果表明有新物相生成;物理稳定性考察结果表明GNA-PEG-LPs在4℃下放置4周,GNA-PEG-LPs的包封率、粒径等基本稳定;另外体外释放的结果表明GNA-PEG-LPs具有缓释的性质。(2)体外细胞药效试验结果表明空白载体基本不对细胞产生毒性。与GNA溶液相比,GNA-PEG-LPs对A549、SGC-7901和HepG2细胞抑制作用和促进其凋亡的药效更加明显,并且上调Bax,caspase-3,下调Bcl-2蛋白的趋势更加明显,表明GNA-PEG-LPs很可能通过线粒体途径诱导细胞凋亡。(3)耳缘静脉血管刺激性试验结果显示GNA-PEG-LPs血管刺激性较小,溶血实验发现,当GNA-PEG-LPs的脂质浓度小于2.28 mg/mL时,明显的溶血现象不会产生。(4)体内抗肿瘤药效试验发现,与GNA原料药相比,GNA-PEG-LPs可以显著抑制LLC荷瘤小鼠的肿瘤生长。免疫组化研究发现GNA-PEG-LPs上调了LLC荷瘤小鼠肿瘤组织Bax,caspase-3蛋白的表达,下调了Bcl-2蛋白的表达。HE染色表明GNA的给药剂量(2mg/kg,隔日给药)对小鼠的主要器官(心、肝、脾、肺、肾)无明显影响,同时也说明了GNA-PEG-LPs的安全性。(5)采用HPLC-UV系统,建立了GNA生物样品的分析方法。比较了单次给药后GNA和GNA-PEG-LPs的药动学差异。结果表明PEG化脂质体包裹GNA后,半衰期延长了2.84倍,AUC增加了2.97倍。结论:本研究成功制备了新藤黄酸PEG化脂质体,可以延长半衰期,减小血管刺激性,在体内外显示较强的抗肿瘤药效,是具有潜力的安全有效的纳米载体。
【图文】：

图 1 图文摘要：新藤黄酸 PEG 脂质体的制备、体内外抗肿瘤药效学、初步药动学研究Fig.1 Graphical abstract: Preparation, in vitro/in vivo antitumor activity and preliminarypharmacokinetics of Gambogenic acid-loaded PEGylated liposomes

1 GNA HPLC 色谱图：A: 空白 PEG 化脂质体; B: GNA; C:GNA-PEGPLC chromatograms of GNA: A: Blank PEG-LPs; B: GNA; C: GNA-P曲线的建立取储备液适量，用甲醇稀释适当倍数即得浓度为 0.02、0.05.00 和 10.00 μg/mL 的系列对照品溶液，分别过 0.45 μm 滤膜件进样，，测定峰面积。重复测定多次（n=5）。以峰面积(y图进行线性回归，回归方程：y=39656x-243.86，(R2=0.999在 0.02~10.00 μg/mL，峰面积和浓度的线性关系良好。度试验取对照品储备液适量，用甲醇定容，配制低、中、高（0.05
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R283.6;R285

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本文编号：2672336