芎柰温敏凝胶的制备及抗骨关节炎初步药效学考察

发布时间：2020-06-06 16:58

【摘要】：骨关节炎(osteoarthritis,OA),是一种以关节软骨退行性病变为主的疾病。OA的总发病率约为15%,目前用于治疗OA最常用的处方药为非甾体类抗炎药,虽能明显的缓解疼痛症状,但毒副作用较大,不宜长期服用。中医药治疗OA通过辨证施治和中药的多成分协同作用,达到缓解症状和改善骨关节功能的效果。透皮局部用药可避免首过效应,药物直达病灶,药效持久稳定,毒副作用小。本研究基于验方芎柰方治疗OA的临床实践,开发成便于外用的温敏凝胶制剂。目的:通过筛选抗OA有效部位,优化制备工艺并进行质量考察,进行药效学及皮肤刺激性研究,为芎柰方抗OA提供科学依据。方法:1.建立芎柰提取物的分析方法,并通过抗炎镇痛实验和抗OA实验,确定芎柰的有效部位。2.采用星点设计-效应面结合Z-综合评价法,优选并制备芎柰温敏凝胶,并考察该制剂的体外释药机理。3.考察芎柰温敏凝胶的理化性质,对该制剂进行定性鉴别和含量测定,并考察该制剂的稳定性。4.采用抗炎镇痛实验和抗OA实验,初步考察芎柰温敏凝胶的抗OA作用,并采用同体比较法,考察该制剂对新西兰兔的皮肤刺激性。结果:1.芎柰醇提物和水提取中FA的含量均为0.787 mg·g-1和0.607 mg·g-1,EPMC的平均含量分别为8.144 mg·g-1和4.157 mg·g-1。与空白组比较,芎柰水提物组和醇提物组的耳廓肿胀度水平和扭体次数水平均明显降低(P0.01),芎柰水提物高剂量组、醇提物组的痛阈提高百分率均明显提高(P0.01),且相同剂量下,芎柰醇提物组的耳廓肿胀度抑制率、疼痛抑制率和痛阈提高百分率较水提物组大(P0.05)。与模型组比较,乙酸乙酯萃取物(EAE)组和正丁醇萃取物(NBAE)组从第二周起能显著减少肿胀度和血清中IL-1β、NO含量(P0.01),且EAE组优于NBAE组(P0.05)。踝关节病理切片显示,EAE组、NBAE组可见少量炎性细胞,关节软骨未见明显破坏。2.芎柰温敏凝胶的最优处方为18.04%P407,0.57%P188,氮酮-薄荷油(1:1)用量比例为1.25%,冷溶温度3.96℃,归一化指标预测值为4.605。通过验证试验得到的芎柰温敏凝胶胶凝温度、粘度、FA的累积透皮通量(12h)均为32.4℃、15.17 Pa·s、144.848μg·cm-2。FA的体外释药符合零级方程,渗透速率常数为0.9910。3.芎柰温敏凝胶呈深棕色,细腻无团块,pH均为5.66,粘度均为15.20 Pa·s,胶凝温度均为32.2℃;TLC表明,芎柰温敏凝胶在相应的位置显示FA及EPMC的亮斑;芎柰温敏凝胶中FA及EPMC的含量均为7.6955 mg·g-1和2.5440 mg·g-1;在3000 r·min-1离心后,芎柰温敏凝胶外观均匀,未分层。在(25±2)℃、(40±2)℃温度条件、(90±5)%湿度条件、(4500±500)lx光照条件、在(4±2)℃条件下避光放置6个月后,未出现样品分层、结块等现象,外观、FA含量、EPMC含量变化不显著。在(60±2)℃条件下,FA的含量有所下降;在(75±5)%湿度条件下,FA及EPMC的含量上升。4.与空白组比较,芎柰温敏凝胶的耳廓肿胀度水平、吸光度水平、扭体次数均明显降低(P0.05),痛阈提高百分率均明显提高(P0.05);与模型组比较,芎柰温敏凝胶从给药后均能减少肿胀度(P0.05),显著降低OA大鼠血清中IL-1β、NO含量(P0.01)。踝关节病理切片显示,芎柰温敏凝胶组可见少量炎性细胞,关节软骨未见明显破坏。单次和多次涂敷芎柰温敏凝胶后新西兰兔的皮肤刺激积分均值分别为0和0.45。皮肤病理切片显示,芎柰温敏凝胶组的皮肤表皮和真皮的分界清晰可见,角质细胞层完整且连续,均未见有炎性细胞浸润和其他病理改变。结论:醋炙芎柰的醇提物中FA和EPMC含量较水提物高,且抗炎镇痛作用较强;芎柰醇提物的EAE是抗OA的有效部位;利用有效部位制备的温敏凝胶,成型性良好,外观均匀,质量稳定,所建立的质量控制方法准确、可靠、专属性强,可较好的控制芎柰温敏凝胶的质量;芎柰温敏凝胶具有抗OA作用,且无皮肤刺激性。
【图文】：

模拟图,模拟图,关节,发病机制

有 67.4%的 OA 患者。1.1.2 OA 的发病机制研究OA 的发病机制目前不明确，可能与遗传、性别、年龄、肥胖等因素有关，这些因素可能通过细胞因子、免疫应答等多种作用途径，造成关节内各组织发生病变，导致畸形和功能丧失，最终影响工作生活等方面。发生病变时，关节软骨由浅蓝白色逐渐变成暗黄色，失去光泽。随后关节软骨消失，露出软骨下骨。软骨下骨摩擦严重处呈现象牙状，摩擦较小处呈现骨赘[7]。软骨降解后，，软骨下骨质呈现不同的病理变化[8]。软骨下骨质呈现斑片状或者片状。由于关节发生不同程度的畸形，骨小梁的承受压力增大，最终导致骨折[9]。软骨下骨出现裂痕，带有炎性的关节液渗入，形成骨包囊，并且关节两端形成骨赘[10]。滑膜在 OA发病机制中有着重要的影响[11]。发生 OA 时，滑膜中充满很多的单核细胞和淋巴细胞，并且呈现增厚和纤维化[12]。

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的发病原因至今为止还不十分清楚，但很多实验发现不同种类的细展过程中有着不同决定作用，它们与软骨、软骨下骨、滑膜等有着图 1-2 所示[14]。胞介素-1(ingterleukin-1, IL-1)是前炎症细胞因子，对软骨的降解和用，很多有核细胞均能分泌[15]。发生OA时，IL-1β主要由软骨细胞胞产生，并分泌到关节腔中，随着其浓度升高，不断侵蚀软骨，胶导致软骨的破坏[16]。A发病过程中，软骨细胞、滑膜中的巨噬细胞等会分泌IL-1等炎症刺激软骨细胞产生基质金属蛋白酶(MMPs)、具有蛋白质水解的金S)等新的炎性因子，加速软骨的降解和破坏[17-20]。一氧化氮(Nitric O炎性细胞因子其中之一[21]。情况下，软骨细胞不会分泌NO，但发生OA病变时，软骨细胞会分，产生炎症反应，进一步损伤软骨等组织[22-26]。
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5;R283.6

【参考文献】