同型半胱氨酸经内质网应激介导心肌细胞凋亡及枸杞多糖的干预作用

发布时间：2020-06-06 17:47

【摘要】：目的探讨内质网应激(ERS)在同型半胱氨酸(Hcy)介导的APOE~(-/-)小鼠心肌细胞及H9C2大鼠心肌细胞凋亡中的作用及枸杞多糖(LBP)的干预效果。方法1.动物:取36只6周龄健康SPF级雄性APOE~(-/-)小鼠,随机分为对照组(CG)、同型半胱氨酸组(HG)、同型半胱氨酸+枸杞多糖组(HLG),每组12只。CG给予普通饮食,盐水灌胃;HG给予含1.7%蛋氨酸的AIN-93G饮食,盐水灌胃;HLG给予含1.7%蛋氨酸的AIN-93G饮食,LBP灌胃。干预24周后处死小鼠,检测血清Hcy浓度,记录心脏脏器系数,TUNEL染色检测各组心肌细胞凋亡差异,免疫组化及蛋白印迹检测ERS相关因子(BIP、ATF6、IRE1、PERK、ERO1-α、CHOP)表达情况。2.细胞:在37℃、5%的CO_2条件下培养H9C2大鼠心肌细胞,取对数生长期细胞分为四组进行试验:对照组(CG):4%的胎牛血清、高糖DMEM培养48h;枸杞多糖组(LG):在4%的胎牛血清、高糖DMEM中加入40mg/L的LBP溶液培养48h;同型半胱氨酸组(HG):在4%的胎牛血清、高糖DMEM中加入200 umol/L的Hcy溶液培养48h;同型半胱氨酸+枸杞多糖组(HLG):在4%的胎牛血清、高糖DMEM中分别加入40mg/L的LBP溶液和200 umol/L的Hcy溶液培养48h。按实验需求分别将上述模型复制在96孔板、24孔板、6孔板中,以完成CCK8细胞活力检测、TUNEL凋亡检测、蛋白印迹等操作,检测ERS相关因子(BIP、ATF6、IRE1、PERK、ERO1-α、CHOP)表达情况。结果1.动物:与CG相比,HG血清Hcy浓度明显升高,心脏脏器系数增加,心肌细胞凋亡增多。ERS相关因子的免疫组化及蛋白印迹结果提示HG较CG的表达量均明显增多,HLG较HG有所降低,差异有统计学意义(P0.05)。2.细胞:LG与CG相比,细胞活力及细胞凋亡无明显差别,ERS相关因子表达无明显差别;HG与CG相比,细胞活力下降、凋亡指数增加、ERS相关因子表达升高;HLG与HG相比,细胞活力有所提升,凋亡指数减小,ERS相关因子表达升高情况有所回调,差异有统计学意义(P0.05)。结论1.Hcy能经ERS介导心肌细胞凋亡;2.LBP能减轻ERS,减少Hcy介导的心肌细胞凋亡,对心肌有保护作用。
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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