厚朴酚干预脂质积聚和炎症反应的信号机制

发布时间：2020-06-24 14:59

【摘要】：非酒精性脂肪肝病是一种全球最常见的慢性肝病,常与肥胖、非酒精性脂肪肝炎、肝硬化、Ⅱ型糖尿病以及肝癌症等代谢性疾病相联系,严重至肝硬化和肝癌可导致死亡。厚朴酚(MG)是中药厚朴中提取的一种木酚素,其具有多种生物学功能,包括抗真菌、抗氧化、抗癌和肝保护的功能。油酸(OA)是游离脂肪酸的一种,是造成非酒精性脂肪肝病的主要物质,它可以诱导人肝癌(HepG2)细胞的脂质积聚。泰洛沙泊(Tyloxapol)是一种表面活性剂,它可以抑制脂肪酶的活性,引起小鼠高脂血症。在本实验中,我们采用OA诱导的HepG2细胞作为非酒精性脂肪肝病的体外模型,通过MTT实验筛选无毒浓度,油红O染色观察HepG2细胞内脂质的含量,并检测甘油三酯(TG)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、活性氧簇(ROS)的含量,应用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和免疫荧光(Immunofluorescence)检测代谢相关信号通路的活性,确定MG对该模型的影响和分子机制。结果发现,OA诱导HepG2细胞有明显的脂质积聚和TG的明显升高,并促进TNF-α和ROS的释放,而MG显著的改善了HepG2细胞的脂质积聚,抑制了TG、TNF-α、ROS的活性;Western Blot实验结果显示MG激活了AKT/AMPK/PPARα信号通路,抑制了SREBP-1c的蛋白表达和MAPKs/NF-κB炎症信号通路;Immunofluorescence实验结果发现,MG激动了P-AMPKα、P-AKT、PPARα的表达,抑制了SREBP-1c的蛋白表达;此外,在Tyloxapol刺激的小鼠体内模型中,Tyloxapol明显的引起的小鼠血液中TG和含量的升高,并造成小鼠肝脏大量的脂滴存在和脂质积聚;MG显著抑制了血液中由Tyloxapol引起的总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量的升高,减轻了肝脏的空泡数量和脂质积聚;Western Blot实验发现,MG激活了AKT和AMPK的磷酸化表达,上调了PPARα的蛋白表达,进而抑制了SREBP-1c的蛋白表达。综上所述,MG拥有明显的抗脂质积聚的作用和抗炎作用作用,并可能为NAFLD及其相关疾病的机制研究和新的药物研发作出一定的借鉴价值。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285
【图文】：

HepG2细胞,毒性,脂质含量,油红

说明这三个浓度对于 HepG2 细胞是无毒的，见图1.3.1A。由细胞油红 O 染色可知，OA（60、120、240、480 μM）明显引起了 HepG2细胞脂质积聚，并根据对应 MOD 指数显示，随着浓度的不断升高，脂质含量越高，（P<0.01），此外，检测细胞内的 TG 的含量也发现，OA（120、240、480μM）与空白组之间有极显著差异（P<0.01），见图 1.3.1B。由实验结果可知，OA 可以引起 HepG2 细胞脂质积聚

HepG2细胞,脂质,空白,细胞毒性实验

1.3.1B OA 对 HepG2 细胞脂质积聚的影响。油红 O 染色、细胞内 TG、M的检测，平均光密度（MOD）＝积分光密度（IOD SUM）/阳性区域总（AREASUM）。注：对比空白组，##p<0.01。2 MG 对 HepG2 细胞的 AMPK 信号通路的影响由 MTT 细胞毒性实验结果可知，MG（2、4、8、16 μg/mL）对 HepG2毒的，与空白组之间无显著性差异（P>0.05）；MG（32 μg/mL）与空存在显著性差异（P<0.05）；MG（64、100 μg/mL）与空白组之间存在异（P<0.01）；这说明 MG（32、64、100 μg/mL）对 HepG2 细胞有毒 1.3.2A。MG（1、2、4、8 μg/mL）处理 HepG2 细胞 24 h 后，Western结果发现，MG（4、8 μg/mL）可以明显的激动 P-AMPK 、P-AMPKβ、P-AKT 的蛋白表达，其与空白组之间有极显著差异（P<0.01）；为了诠释

【参考文献】