药食两用白果种仁和南非叶的化学成分研究

发布时间：2020-08-09 03:26

【摘要】：“药食两用”的概念是指既可以作为药物防病治病又可以作为营养保健食品,因其具有预防疾病又能长期安全食用的优势,越来越被人们所关注和研究。因此,本论文选取同时具有药食两用特点的“白果种仁”和“南非叶”作为研究对象,并对其正丁醇部位的小分子成分进行了系统的研究。一、白果种仁小分子活性成分研究白果为银杏科银杏属植物银杏(Ginkgo biloba L.)的干燥成熟种子。白果的药用价值历代本草均有记载,并作为传统中药一直沿用至今;白果亦具有食用价值,其营养丰富、美味可口,具有极佳的营养保健功能,自明清以来被列为食疗佳品,食后可养生延年。近年来,人们对白果种仁中的蛋白质、淀粉、多糖等生物大分子和银杏内酯类成分研究较多,而对于白果具有的传统药用功效和保健功能的特征性小分子成分却研究较少。为了寻找白果种仁的特征性小分子成分,由于白果的小极性部位存在大量的银杏内酯类成分,本论文直接选取白果正丁醇部位进行化学成分研究。运用多种分离方法(大孔树脂、SephadexLH-20、HPLC制备色谱等)得到了 13个化合物,并用多种波谱技术(UV,MS,HNMR,13CNMR,2DNMR)鉴定了它们的结构,其中2个为新化合物,3个为首次从白果中分离得到的化合物,3个为银杏毒素类化合物,4'-O-methylpyridoxine(MPN)和2个MPN类化合物(MPNs)。其中,一个为首次从白果中分离的MPNs(julibrinⅡ)。为了进一步研究白果中的MPNs,本论文对白果中的MPNs进行了一系列的研究如下:首先,考察并优化了一个快速、简单、低成本富集和分离MPNs标准品的方法。再次,建立了 HPLC-DAD测定MPNs的方法,考察了白果种仁在生长期和成熟期的MPNs含量的变化趋势,研究了在不同炮制方法下,白果种仁中MPNs的含量变化。最后,为了寻找白果作为传统中药的物质基础,我们对白果种仁中的MPN首次进行了活性研究,并通过两个药理实验评估了 MPN的镇咳和祛痰活性,结果显示MPN具有较好的镇咳和祛痰活性。为了进一步寻找白果中具有保健功效的抗氧化活性成分,我们从抗氧化活性部位定向分离出了 4个含量较大的苯丙素和木脂素糖苷类标准品,并通过DPPH实验测定了它们的抗氧化活性,其中三个化合物显示了较强的抗氧化活性(IC50:67-100 μM)。为了探究其它未知的抗氧化活性成分,本论文建立了 HPLC/DAD-Q-TOF-MS/MS方法对其它成分进行了结构分析,并通过与标准品质谱裂解特征和规律进行比较分析,从中鉴定了 16个苯丙素和木脂素糖苷类化合物,包括苯丙素类、呋喃型木脂素、苯并呋喃型新木脂素类,8-0-4'新木脂素类。二、药食两用植物-南非叶的化学成分研究南非叶为菊科扁桃斑鸠菊植物扁桃斑鸠菊(Vernonia amygdalina Del.)的叶。原产于热带非洲,并广泛种植于西非。在尼日利亚当地被作为一种蔬菜食用,人们通过捣碎和清洗来去掉叶子本身的苦味。在非洲当地,南非叶也可以作为药物给人和动物治疗多种疾病。因此,南非叶也被誉为药食两用植物。为了进一步研究南非叶的有效活性成分,本论文对南非叶进行了化学成分研究。以HPLC-DAD为导向,(硅胶柱色谱,ODS柱色谱和pre-HPLC)对南非叶正丁醇部位进行分离,共得到9个化合物,并根据其理化性质及光谱数据(UV,MS,H NMR,13C NMR,2D NMR)鉴定了他们的结构,他们的结构分别为:vemoamyosideD1(N-1),vernoniosideAs(N-2),vemoamyoside E(N-3),vernoamyoside D2(N-4),vernoamyoside C1(N-5),vernoamyoside C2(N-6),Roseoside Ⅱ(N-7),vemoamyoside D(N-8),vemoamyoside C(N-9)。其中N-1-6为新的甾体皂苷类化合物,N-7为首次从南非叶中分离得到的化合物。综上所述,白果种仁和南非叶均为药食两用药材,本论文分别对白果和南非叶的正丁醇部位糖苷类化合物进行了化学成分研究,并探索了白果药用和食用价值的物质基础,为白果和南非叶的进一步开发利用奠定了一点基础。
【学位授予单位】：沈阳药科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284
【图文】：

结构图,化合物,相关信号,图谱

＾＇ｃ邋ＨＭＢＣ逡逑图２－２化合物１关键的ＨＭＢＣ邋（Ｈ—Ｃ））的相关信号逡逑化合物２逡逑ｈ３ｃ0逦ｏｃｈ３逡逑图２－３化合物２的结构图逡逑白色无定型粉末，易溶于甲醇。香草醛浓硫酸显紫红色＾邋ＨＲ－ＥＳＩ－ＭＳ给出７０２．２９６９逡逑［Ｍ＋ＮＨ４］＋（ｃａｌｃｄ．邋７０２．２９６８），结合氢谱、碳谱推测其分子式为Ｃ３２Ｈ４４0ｉ６。在１ＨＮＭＲ谱逡逑中，给出一组苯环上ＡＢＸ偶合质子信号而７．１４邋（１Ｈ，ｄ，邋＞／＝邋８．４邋Ｈｚ），７．０３邋（１Ｈ，ｂｒ邋ｓ），６．９３逡逑（ｌＨ，ｂｒｄ），２个孤立芳香氢质子信号＜５ｈ６．７６（１Ｈ，ｓ），６．７４（ｌＨ，ｓ），邋２个甲氧基质子信号逡逑３．８７邋（３Ｈ，ｓ），邋３．８３邋（３Ｈ，邋ｓ），邋２邋组邋Ｃ３邋结构单元质子信号＜５ｈ２．６８邋（２Ｈ，邋ｂｒ邋ｔ，邋７．４邋Ｈｚ），邋１．９１邋（２Ｈ，逡逑ｍ），邋３．９３邋（１Ｈ，邋ｍ），邋３．５４邋（１Ｈ，邋ｍ），邋５．５５邋（１Ｈ，邋ｄ，Ｊ＝邋５．８邋Ｈｚ），邋３．４６邋（１Ｈ，邋ｍ），邋３．８３邋（１Ｈ，邋ｍ），邋３．７４逡逑（ｌＨ，ｍ），两个苯并呋喃新木脂素特征氢信号而５．５５（Ｈ－７），３．４６（Ｈ－８）。在１３ＣＮＭＲ谱中逡逑显示有３２个碳信号

白果,种仁,不同生长期

３．６不同炮制方法白果种仁中ＭＰＮ类成分的含量变化逡逑对不Ｎ炮制方法的闩果种仁（炒白果种仁、蒸白果种仁、微波加热白果种仁、水煮逡逑Ａ果种彳：、未处理白果种仁）按卜．述测定方法进彳ｒ邋了含量测定，结果见表（表３－３，不同逡逑炮制力＇法的Ｈ果种彳．屮的ＭＰＮ邋Ｓ邋ＭＰＮ－５Ｍ３ＩＵ的含量变化趋势图见阁３－４。逡逑逦表３－３不同炮制方法白果种仁中ＭＰＮ与ＭＰＮ－５ＬＧＩＵ的含量测定结果逦逡逑Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋ｍｅｔｈｏｄｓ逦ＭＰＮ邋（ｍｇ／ｇ）逦ＭＰＮ－５’－ｇｌｕ邋（ｍｇ／ｇ）逡逑Ｓｔｉｒ－ｆｒｙｉｎｇ逦０．０４３２２士０．００２逦０？邋１３１５土０．０１２逡逑ｓｔｅａｍｉｎｇ逦０．０３４１２土０．００７逦０．１３４３土邋０．００６逡逑Ｍｉｃｒｏｗａｖｅ逦ｎ．ｄ逦０．０９６５０±０．０２５逡逑ｂｏｉｌｉｎｇ逦０．０２５６０±０．００３逦０．０８５２０±０．００６逡逑Ｎｏｎ－ｔｒｅａｔｅｄ逦０．１７７１邋土０．０２６逦０．０７００士邋０．００４逡逑Ａｌｌ邋ｖａｌｕｅｓ邋ａｒｅ邋ｔｈｅ邋ｍｅａｎ邋土ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｄｅｖｉａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｈｒｅｅ邋ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ邋ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．邋ｎ．ｄ＝ｎｏｔ邋ｄｅｔｅｃｔｅｄ邋．逡逑

不同炮制,白果,种仁

３．７讨论与小结逡逑本章建立了用ＨＰＬＣ－ＤＡＤ测定白果种仁中ＭＰＮ和ＭＰＮ－５＾ｇｌｕ含量的方法，并用逡逑建立的方法研究了不同生长期和不同炮制方法白果种仁中ＭＰＮ和ＭＰＮ＼Ｖ－ｇｌｕ的含量变逡逑化，由图３－１可以看出，ＭＰＮ－５＾ｇｌｕ在白果种仁在未成熟期几乎检测不到，一直到九月逡逑的采收期，ＭＰＮ－５＇－ｇｌｕ的含量也明显低于ＭＰＮ。其在九月中旬其含量达到峰值，九月逡逑下旬含量明显降低到成熟期最低水平。不同的是，ＭＰＮ在白果种仁的发育期就可以检逡逑测到，从六月末到九月中旬之间，ＭＰＮ含量呈现两次升高和降低的趋势，其中在七月逡逑下旬和九月初的时间点含量分别达到最高，在九月中旬降低到成熟期最低点，并与十月逡逑初采收的种仁中ＭＰＮ含量相当，与之对应的是ＭＰＮ－５Ｌｇｌｕ的含量升高到了成熟期的最逡逑高点。从以上结果可知，与ＭＰＮ－５＇－ｇｌｕ相比，ＭＰＮ在白果的生长期和成熟期含量较高，逡逑并在七月雨水充足时达到最高，在九月中旬和十月初的采收期ＭＰＮ的含量有小幅度下逡逑降，初步明确了这类化合物在白果生长和成熟期的累积规律，为后续研究奠定基础。逡逑由图３－２可以看出，不同炮制方法对白果种仁中ＭＰＮ和ＭＰＮ－５？ｌｕ量的影响，逡逑

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