人参总皂苷抗博来霉素诱导小鼠肺纤维化的作用研究

发布时间：2020-09-10 14:53

　　 目的:通过建立博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化(Pulmonary fibrosis,PF)模型,观察人参总皂苷(total ginsenoside,TG)对PF的效应,并探讨其可能的作用机制。方法:通过单次气管内滴注BLM(5 mg/kg)建立C57BL/6J小鼠PF模型。实验动物分为假手术对照组,模型对照组,TG给药组(分别给药14 d和28 d),泼尼松组(28 d)。以肺系数,小鼠肺组织病理形态学改变,α-SMA的蛋白表达,明确TG对PF不同阶段的疗效。检测给药14 d小鼠肺组织中E-cadherin、collagenIII、TGF-β1、TIMP-1、MMP-2、MMP-9、趋化因子(CX3CL1)及其受体CX3CR1蛋白表达。同时检测血清中可溶型不规则趋化因子(soluble type fractalkine,sFKN)及CX3CR1含量。为进一步探讨TG对PF小鼠的作用是否与CX3CL1有关,建立CX3CL1基因敲除(CX3CL1~(-/-))模式小鼠,以同性别同月龄野生型(wild-type,WT)小鼠对照研究,分别分为假手术对照组,模型组,TG 80 mg/kg组,制模后连续给药14 d,观察各组小鼠的一般状态,计算肺系数,观察各组小鼠肺组织病理形态学改变,检测α-SMA及collagenIII的蛋白表达,观察TG对CX3CL1基因敲除后PF小鼠的疗效变化。分子生物学技术检测给药28 d小鼠肺组织TGF-β1、smad2、smad3、smad7、TIMP-1、MMP-2和MMP-9 mRNA及蛋白表达。结果:BLM造模14 d后,模型组小鼠一般情况较差,小鼠肺系数明显高于假手术组,肺泡炎明显,胶原沉积增多,α-SMA、collagenIII、MMP-2、MMP-9、CX3CL1及其受体CX3CR1水平显著升高,E-cadherin和TIMP-1水平显著下降,TGF-β1蛋白表达量有升高趋势但无统计学差异。TG给药14 d可显著改善模型小鼠一般情况,降低小鼠肺系数,减轻肺泡炎,抑制胶原沉积,下调α-SMA、collagenIII、MMP-2、MMP-9、CX3CL1及其受体CX3CR1水平,提高E-cadherin和TIMP-1水平。造模14 d后,CX3CL1~(-/-)小鼠出现PF,但病损程度显著轻于WT小鼠,TG对CX3CL1~(-/-)小鼠PF的缓解作用不及对WT小鼠PF的缓解作用。造模28 d后,与假手术组比,模型组小鼠一般情况较差,肺系数明显增高,肺泡炎及纤维化明显,肺组织中α-SMA蛋白表达明显增加。TGF-β1、smad2、smad3、TIMP-1、MMP-2及MMP-9基因和蛋白表达水平显著上调,smad7基因和蛋白表达水平则显著下调。与模型组比较,TG及泼尼松可明显改善模型小鼠一般情况,降低小鼠肺系数,改善肺泡炎及纤维化,TG引起PF模型小鼠α-SMA、TGF-β1、smad2、smad3、TIMP-1、MMP-2及MMP-9水平显著下调,而显著上调smad7水平。结论:TG可以改善小鼠PF,其作用机制在纤维化形成早期则与抑制不规则趋化因子至少部分相关;而纤维化形成后期与调节TGF-β1/smad信号传导通路和基质金属蛋白酶系统有关。
【学位单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

23图 1 TG 对 PF 小鼠肺组织病理形态学的影响 （HE、Masson Bar=50 μm，箭头所指为蛋性表达）Fig.1 Effect of TG on lung histomorphology in PF mice (HE, Masson Bar=50 μm, pprotein expression was indicated by arrows,x SEM, n=6, *P<0.05 vs sham group and#vs model group）2.1.3 TG 对 PF 小鼠α-SMA 及 collagenIII 蛋白表达的影响IHC 染色显示，α-SMA 蛋白主要表达于气管周围，collagenIII 蛋白表达于肺气管、血管周围，以棕褐色染色为阳性表达。与 Sham 组比较，Model 组小鼠肺α-SMA 及 collagenIII 蛋白表达量明显增加（P<0.05）。与 Model 组相比，TG 80 剂量组α-SMA 及 collagenIII 蛋白表达量减少（P<0.05）（见图 2）。

24图 2 TG 对 PF 小鼠肺组织α-SMA 及 collagenIII 蛋白表达的影响（x SEM, n=5, Bar=箭头所指为蛋白阳性表达)Fig.2 Effect of TG on α-SMA and collagenIII protein in lung tissue of PF mice (x SEMBar=20 μm, positive protein expression was indicated by arrows, *P<0.05 vs sham grou#P<0.05 vs model group)2.1.4 Western blotting 观察 TG 对 PF 小鼠 E-cadherin、TGF-β1、TIMP-1、M及 MMP-9 蛋白表达的影响Western blotting 显示，与 Sham 组比较，Model 组小鼠 E-cadherin 及 TIMP-1水平明显下降（P＜0.05）；MMP-2 及 MMP-9 蛋白水平显著上调（P＜0.05MMP-2/TIMP-1 为 2.25，MMP-9/TIMP-1 为 1.84，MMPs/TIMPs 比例升高；而 TG蛋白水平有增高的趋势，但无统计学差异（P>0.05）。TG 80 mg/kg 给药 14 d 后起了 E-cadherin 蛋白水平的明显上调及 MMP-9 蛋白水平显著下调（P＜0.05），TI

图 3 TG 对 PF 小鼠 E-cadherin、TGF-β1、TIMP-1、MMP-2 及 MMP-9 蛋白表达的影响 (x SEM, n=5）Fig.3 Effect of TG on E-cadherin, TGF-β1, TIMP-1, MMP-2 and MMP-9 in PF mice (x SEM,n=5, *P<0.05 vs sham group and#P<0.05 vs model group)2.1.5 TG 对 PF 小鼠 CX3CL1/CX3CR1 蛋白表达的影响IF 染色显示，CX3CL1/CX3CR1 在肺部实变区域表达较多，以红色染色为阳性表达。与 Sham 组比较，Model 组小鼠肺组织中 CX3CL1 及 CX3CR1 蛋白表达增加。与Model 组相比，TG 80 mg/kg 给药 14 d 后，肺组织中 CX3CL1 及 CX3CR1 蛋白表达减少，（见图 4）。

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本文编号：2815951