马钱子碱对三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤生长的影响及其可能机制探讨

发布时间：2020-09-27 21:50

　　 目的研究马钱子碱对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响及其可能机制的探讨。方法将处于对数生长期的MDA-MB-231注射到裸鼠皮下,构建三阴性乳腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,并将造模成功的裸鼠随机分为马钱子碱低、中、高剂量组(15、30、60 mg/kg),阳性对照组(紫杉醇5 mg/kg)和阴性对照组(1%DMSO)。其中马钱子碱组和阴性对照组采用灌胃给药,每天一次;紫杉醇组采用腹腔注射,两天一次,共给药4周。期间每周两次对裸鼠体重、移植瘤长、短径进行测量,并按公式计算移植瘤的体积。治疗结束后隔天采用脱颈处死法处死裸鼠,剥离移植瘤。观察马钱子碱对裸鼠皮下移植瘤的生长影响,并计算各组裸鼠移植瘤大小、重量及肿瘤生长抑制率,细胞增殖相关核抗原(Ki-67)染色评估肿瘤细胞增殖情况;凋亡原位末端标记法(TUNEL实验)及凋亡蛋白Caspase-3免疫组化染色来评估马钱子碱对裸鼠移植瘤细胞凋亡的影响。体外培养三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,并用不同浓度的马钱子碱(25、50、100、200、400μg/m L)处理MDA-MB-231细胞48 h,收取细胞中的总蛋白,用蛋白质免疫印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达水平,观察不同浓度的马钱子碱处理三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞后,对凋亡蛋白Caspase-3表达的影响。结果在体内实验中,皮下注射乳腺癌MDA-MB-231细胞6周后,共有16只裸鼠造模成功,移植瘤长径约0.5 cm,其中一只因进食及营养状况较差,舍弃不用,余下15只裸鼠随机分为五组,并进行相应的治疗。治疗结束后裸鼠移植瘤的生长情况显示:与阴性对照组相比,马钱子碱中、高剂量组(30、60 mg/kg)及阳性对照组(紫杉醇5 mg/kg)移植瘤体积明显缩小,差异具有统计学意义,而马钱子碱低剂量组(15 mg/kg)移植瘤体积未见明显差别;与阳性对照组相比,阴性对照组及马钱子碱低剂量组移植瘤体积显著增大,而马钱子碱高、中剂量组无明显区别。对各组移植瘤标本进行Ki-67染色、TUNEL实验及Caspase-3免疫组化实验结果中提示:与阴性对照组相比,马钱子碱中、高剂量组(30、60 mg/kg)及阳性对照组(紫杉醇5 mg/kg)在上述实验中均具有显著差别,而马钱子碱低剂量组(15 mg/kg)则无明显差别。在体外实验中,蛋白质印迹法检测结果显示:200、400μg/m L浓度的马钱子碱处理的三阴性乳腺癌细胞(TNBC),其Caspase-3蛋白的表达水平明显高于其他剂量组及阴性对照组,而其他浓度的马钱子碱处理的三阴性乳腺癌细胞,Caspase-3蛋白的表达水平未见明显区别。结论马钱子碱能抑制三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与马钱子碱诱导三阴性乳腺癌细胞发生凋亡有关。
【学位单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

19图 1：治疗结束后各组小鼠剥离的移植瘤大体图片E 依次为：阴性对照组、马钱子碱 15、30、60mg/kg 组及紫杉ages of transplanted tumors of mice in each group after treatmentnegative control group, brucine 15, 30, 60 mg/kg group and paclita

图 3 各组移植瘤 Ki-67 免疫组化阳性细胞数占阴性对照组百分比与阴性对照组相比较：**p<0.01；与紫杉醇组相比：##p<0.01mber of Ki-67 immunohistochemical positive cells in each group accounpercentage of negative control groupd with the negative control group:**p<0.01; compared with the paclitaxe

ining and Ki-67 staining of transplanted tumors of nude mice in eachMagnification × 200: negative control group; B:brucine 15 mg/kg; C: brucine 30 mg/kg;D: brucine 60 mg/kg; E: paclitaxel group图 2 对各组裸鼠移植瘤进行 HE 染色及 Ki-67 染色 放大倍数×2：阴性对照组；B：马钱子碱 15mg/kg；C：马钱子碱 30mg/kg；D：马钱子碱 60mg/kg；E：紫杉醇组

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本文编号：2828415