中华猕猴桃根乙酸乙酯提取物抑制下咽癌Fadu细胞增殖作用研究

发布时间：2020-09-30 17:51

　　下咽癌属于头颈部恶性肿瘤,易出现局部转移及早期远处扩散,恶性程度较高,总生存率较低。临床上70%患者确诊时已处于癌症中晚期,这是因为下咽癌发病部位隐匿、缺乏早期临床症状等原因。目前外科手术是临床上治疗下咽癌最常采用的手段,当手术不能完全切除肿瘤组织或患者无法耐受手术治疗时,往往还需要临床医生结合患者个人实际情况进行特异性治疗方案设计,选择结合放化疗等辅助治疗手段,尽管如此下咽癌患者的预后仍然不好,五年生存率也不高。此外,下咽癌患者在手术或放化疗之后,可能或多或少地出现身体某些机能的损伤和缺失,严重的甚至对日常生活造成一定的困扰,影响了患者的生活质量,也给患者及其家庭造成巨大的经济和精神负担。中医作为我国传统医学,一直在远期治疗方面有所建树,中医药治疗癌症可以大大提高患者的生活质量和生存率。随着近年中医药治疗癌症的研究得到越来越多的重视,我们希望开启中医药治疗头颈部肿瘤的新方法,以提高患者的生存率及生活质量。为此我们选择了常见中医药材藤梨根(猕猴桃根)作为我们的研究药物。目的:选取中华猕猴桃根乙酸乙酯提取物EE-ACP为研究药物,深入观察具有抗癌作用的传统中药材对于人下咽癌Fadu细胞的抑制作用,并判断其可能的作用机制。方法:实验运用CCK8法对比不同浓度梯度的EE-ACP对Fadu细胞生长影响情况;Hoechst33258法记录EE-ACP作用后Fadu细胞形态学改变;流式细胞仪测试不同浓度作用下Fadu细胞凋亡坏死比例及分布情况,并通过Western Blot研究其潜在的作用机制。实验数值选取了均数士标准差的方式和SPSS23.0统计专用软件进行记录,检验水平以P0.05定为是结果具有统计学差异。结果:1.CCK8法:用递增浓度梯度的EE-ACP(100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml、300μg/ml、350μg/ml、400μg/ml、500μg/ml、700μg/ml)分别作用于Fadu细胞24、48、72 h后增殖抑制且差异具有统计学意义(P0.05),存在时间-浓度关系,通过计算可得,其三个时间组的IC50分别为300,160和100μg/ml。2.Hoechst33258染色法:不同浓度梯度的的EE-ACP(150μg/ml、250μg/ml、350μg/ml、450μg/ml、550μg/ml)分别作用于Fadu细胞24 h后,显微镜下观察蓝色深染的细胞核数量逐渐上升,这一现象意味着细胞凋亡的数量和比例增高。3.流式细胞凋亡:FITC-Annexin V/PI双染法显示,递增浓度梯度的EE-ACP(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml)分别作用Fadu细胞24 h后,第二和第四象限红色点数量增多,代表Fadu细胞早晚期的凋亡数量加大。4.Western Blot法:结果显示,不同浓度EE-ACP(10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml)作用Fadu细胞24 h后,TP53蛋白表达量逐渐随着EE-ACP浓度的增加而呈现出下降的趋势。结论:中华猕猴桃根乙酸乙酯提取物EE-ACP可以抑制Fadu细胞增殖,引发早晚期凋亡,其可能的作用机制与调控突变型TP53基因的表达有关。
【学位单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

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实验结果如图 1 所示。在图 1 中不难发现，当 EE-ACμ g/ml 后，Fadu 细胞的抑制率与 600μ g/ml 组相比较，差异不具（p>0.05）。最终我们选取的浓度梯度是从 100μ g/ml 至 700μ g等条件下设计了 5-氟尿嘧啶对于下咽癌 Fadu 细胞的最适浓度曲果如图 2 所示。为了对照我们选取了5-Fu在同样条件下与EE-ACP比较分析两两组实验结果如图 3 所示，根据图像分析在 24、48、72 小时作用后和对照组 5-Fu 的细胞存活率曲线均向下走行且抑制效果表现出强度依赖性。与 5-氟尿嘧啶组相比 EE-ACP 对 Fadu 细胞的抑制效果逐渐赶尿嘧啶组并最终将 Fadu 细胞存活率控制在 10%以内，在 24、48、EE-ACP 对 Fadu 细胞的 IC50 分别为 300，160 和 100μ g/ ml。在里，作用 24、48h 后 5-氟尿嘧啶组均未达到半数致死，作用 72h对 Fadu 细胞的 IC50 为 100μ g/ ml。

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-氟尿嘧啶对下咽癌Fadu细胞抑制作用曲线

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第 19 页图 3 CCK8 法，5-氟尿嘧啶和中华猕猴桃根对下咽癌 Fadu 细胞的抑制3.2 Hoechst33258 染色观察 EE-ACP 对 Fadu 细胞核形态学影响hoechst33258 实验法可以根据细胞核染色的情况判断细胞的状态，这种方法形象直观操作简便、可以直接在镜下看到药物作用后细胞的结构变化。实验结

【参考文献】