益生菌发酵枇杷提取物的功效学研究

发布时间：2020-10-10 11:44

　　 研究背景枇杷提取物作为传统中药已被广泛用于中国和其他东亚国家的各种慢性病治疗。枇杷提取物中当前已有酚类、三萜类等多种具有生物活性的化合物的发现,具有抗炎、降血糖、抗癌和抗氧化等药效。肠道菌群参与一系列对宿主健康至关重要的生理过程,反过来,宿主也会影响肠道菌群的分布。目前已经发现肠道菌群的构成和分布可由饮食调控,尤其是包含益生菌、益生元和合生元的食物。植物提取物经益生菌发酵后常表现出该植物的相关活性,甚至产生比未发酵前更优越的生物活性。同时草本植物提取物可能含益生元,而帮助益生菌定植。利用益生菌发酵枇杷提取物能否产生更好的传统功效,是否具有润肠通便及优化肠道菌群的功效,这在以往的研究中并未涉及。研究目的1.探讨益生菌发酵枇杷提取物的抗炎、止咳和祛痰三种枇杷传统功效。2.探讨益生菌发酵枇杷提取物是否具有润肠通便的功效。3.探讨益生菌发酵枇杷提取物对小鼠肠道菌群结构的影响。研究方法和结果1.益生菌发酵枇杷提取物的抗炎功效通过构建小鼠耳肿胀炎症模型,检测不同类型枇杷提取物对小鼠耳肿胀程度的影响。与阴性对照组相比,益生菌发酵枇杷饮组和益生菌发酵枇杷膏组的小鼠耳肿胀有明显的抑制,抑制率分别为23.33%和21.93%。未发酵枇杷饮组和未发酵枇杷膏组小鼠耳肿胀没有得到抑制。2.益生菌发酵枇杷提取物的止咳功效利用浓氨水构建小鼠咳嗽模型,检测不同类型枇杷提取物对小鼠咳嗽潜伏期和咳嗽次数的影响。益生菌发酵枇杷饮组的咳嗽潜伏期为57.40±5.18s,与阴性对照组相比明显延长,并存在统计学差异(P=0.046)。益生菌发酵枇杷饮组和益生菌发酵枇杷膏组的咳嗽次数分别为42.80±2.85和49.10±1.58次,与阴性对照组对比明显减少,且具有统计学差异(P=0.001、0.013)。未发酵枇杷饮组和未发酵枇杷膏组则未发现明显抑制咳嗽的情况。3.益生菌发酵枇杷提取物的祛痰功效与阴性对照组相比,其余各实验组的呼吸道酚红分泌量也有不同程度的提高,其中益生菌发酵枇杷饮组、未发酵枇杷饮组及益生菌发酵枇杷膏组的呼吸道酚红分泌量提高较明显,分别为3.42±0.41、2.79±0.10和3.30±0.33μ g/ml,并存在显著的统计学差异(P=0.003、0.001、0.001)。未发酵枇杷膏组没有发现明显变化。4.益生菌发酵枇杷提取物的润肠通便功效利用盐酸洛哌丁胺构建小鼠便秘模型,检测益生菌发酵枇杷提取物对小鼠的肠道推进率和排便情况的影响。与模型对照组相比,益生菌发酵枇杷饮高剂量组和益生菌发酵枇杷膏高剂量组的肠道推进率明显提高,分别为87.70±5.01%和88.25±4.07%,并存在统计学差异(P=0.042、0.02)。益生菌发酵枇杷饮高剂量组与益生菌发酵枇杷饮低剂量组的排首粒黑便时间均显著缩短,分别为185.60±29.08和262.80±29.52min,并具有统计学差异(P=0.000、0.006)。益生菌发酵枇杷饮高剂量组和益生菌发酵枇杷膏高剂量组的8h排黑便数量明显增多,分别达到6.60±1.08个和7.50±0.69个,且存在统计学差异(P=0.003、0.000)。5.益生菌发酵枇杷提取物的肠道菌群调节功效分别对不同给药组小鼠给药前后的肠道微生物群进行16SrDNA测序,分析菌群多样性和差异性,找到差异性菌群。研究发现,各组样品中占比最高的两种菌是厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)。从Alpha多样性指数结果来看,各组样品差异不大。其中益生菌发酵枇杷饮组的物种丰度略高于其余组,未发酵枇杷饮组的物种多样性略高于其余组。Beta多样性分析显示,各组小鼠给药前肠道菌群结构相似。给药后各实验组与阴性对照组相比出现不同程度差异,其中益生菌发酵枇杷膏组的差异性最明显。给药后各组小鼠肠道菌群LEfSe分析结果显示,与阴性对照组相比,益生菌发酵枇杷饮组小鼠肠道的特异性菌群有:Muribaculaceae、厌氧原体属(Anaero-plasma)、Lactobacillus gallinarum、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)等。未发酵枇杷饮组小鼠肠道中的特异性菌群最多,包括:Muribaculaceae、阿克曼菌属(Akkermansia)、Lactobacillus gallinarum、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)、梭杆菌属(Fusobac terium)等。益生菌发酵枇杷膏组小鼠肠道的特异性菌群包括:Muribaculaceae、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)、红蝽菌科((Coriobacteriaceae)、Helicobacter trogontum等。研究结论1.益生菌发酵枇杷饮和益生菌发酵枇杷膏具有较好的抗炎、止咳功效,益生菌发酵枇杷提取物的抗炎、止咳功效优于未发酵枇杷提取物。2.益生菌发酵枇杷饮、未发酵枇杷饮和益生菌发酵枇杷膏具有良好的祛痰功效。3.益生菌发酵枇杷饮和益生菌发酵枇杷膏有润肠通便的功效。4.不同枇杷提取物对小鼠肠道菌群数量影响不大,但使其结构产生较大变化。益生菌发酵枇杷饮优化肠道菌群结构方面功效最佳。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

＊和＊＊表示。记录数据用ＳＰＳＳ２５．?０进行处理。??３．实验结果??从图１与表３的咳嗽潜伏期数据来看，与阴性对照组相比，阳性对照组的咳??嗽潜伏期明显延长，达到６６．?００±６．?６２ｓ，并存在显著的统计学差异，Ｐ＝０．?００６。??其余各实验组与阴性对照组相比，咳嗽潜伏期也存在不同程度的延长情况，其中??益生菌发酵枇杷饮组与阴性对照组间存在统计学差异，咳嗽潜伏期为??５７．?４０±５．１８ｓ，Ｐ＝０．?０４６。??从图２与表３的咳嗽次数来看，阳性对照组与阴性对照组相比较，咳嗽次数??明显减少，咳嗽次数为４１．?７３±２．?８１次，并且有显著的统计学差异，Ｐ＝０．?００１。??与阴性对照组相比，其余各组咳嗽次数也有不同程度的减少，其中益生菌发酵枇??杷饮组与益生菌发酵枇杷膏组均具有统计学差异

益生菌发酵枇杷饮组与阴性对照组间存在统计学差异，咳嗽潜伏期为??５７．?４０±５．１８ｓ，Ｐ＝０．?０４６。??从图２与表３的咳嗽次数来看，阳性对照组与阴性对照组相比较，咳嗽次数??明显减少，咳嗽次数为４１．?７３±２．?８１次，并且有显著的统计学差异，Ｐ＝０．?００１。??与阴性对照组相比，其余各组咳嗽次数也有不同程度的减少，其中益生菌发酵枇??杷饮组与益生菌发酵枇杷膏组均具有统计学差异，咳嗽次数分别为４２．?８０±２．?８５??次和４９．?１０±１．?５８次，Ｐ值分别为０．?００１和０．?０１３。??表３不同枇杷提取物对小鼠咳嗽潜伏期及咳嗽次数的影响??组别?动物数（只）咳嗽潜伏期（ｓ）?咳嗽次数（次）??阴性对照?１０?４０．２０±６．?１５?５８．２０±２．?７９??阳性对照?１０?６６．００±６．６２＊＊?４１．７３±２．８广??益生菌发酵枇杷饮?１０?５７．４０±５．?１８＊?４２．８０±２．８５＂??未发酵枇杷饮?１０?４７．?１８土５．?９７?５０．?３６±４．?１６??益生菌发酵枇杷膏?１０?４７．?００±９．?３６?４９．?１０土?１．５８＊??未发酵枇杷膏?１０

视为有统计学意义，分别以＊和＊＊表示。记录数据用ＳＰＳＳ２５．０进行处理。??３？实验结果??图３以吸光度０Ｄ值为横坐标，酚红浓度为纵坐标，制作标准曲线。根据酚??红标准曲线，得出线性回归方程为Ｙ＝２８．２０３Ｘ＿１．２９０１，相关系数Ｒ２＝０．９９９８。由??此可知测定样品含量在０．?２５？８?Ｐ?ｇ／ｍｌ范围内线性关系良好。??表４与图４可以看出，与阴性对照组相比，阳性对照组的呼吸道酚红分泌量??明显升高，达到３．?５７±０．?３１ｙｇ／ｍｌ，且具有显著的统计学差异，Ｐ＝０．０００。与阴??性对照组相比，其余各实验组的呼吸道酚红分泌量也有不同程度的提高，其中益??生菌发酵枇杷饮组、未发酵枇杷饮组及益生菌发酵枇杷膏组的呼吸道酚红分泌量??提高较明显，呼吸道酚红分泌量分别为３．?４２±０．?４１?ｕ?ｇ／ｍｌ、２．?７９±０．?１０?ｕ?ｇ／ｍｌ、??３．?３０±０．?３３?ｙ?ｇ／ｍｌ，并存在显著的统计学差异，Ｐ值分别为０．?００３、０．?００１和０．?００１。??２２??
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本文编号：2835141